Туберкулезная палочка — аэроб — не растет при отсутствии кислорода. Наилучший рост наблюдается при температуре 37—38°. Реакция среды должна быть близка к нейтральной. Наилучший рН 6,8—7,2. На питательных средах туберкулезные палочки растут медленно Росту возбудителя туберкулеза человека способствует прибавление к питательной среде глицерина. Обычно для посева применяется глицериновый картофель по Павловскому (см. для этой и других сред главу «Приготовление питательных сред»). На картофеле культура вырастает в виде бородавчатых групп сероватого цвета

На глицериновом бульоне с агаром появляется чешуйчатый налет, который постепенно формируется в бородавчатые образования. Вначале налет окрашен в бледно-желтый цвет, который по мере роста изменяется в буро-красный.

Быстрее и обильнее происходит рост на яичных средах, например, на наиболее употребительной яичной среде Петрова На жидком мясо-пептонном бульоне с добавлением 4—5% глицерина туберкулезная палочка растет только на поверхности в виде легкой пленки, по мере роста пленка становится толще и приобретает складчато-бугристый вид Пленка окрашена в желтоватый цвет, причем бульон остается прозрачным

Перед посевом следует очистить материал от посторонних микробов, загрязняющих материал, а также необходимо сделать его однородным Очистка основана на свойстве туберкулезной палочки сохранять жизнеспособность после обработки кислотой или щелочью Для выполнения этого к 3 мл исследуемых выделений добавляют 6 мл 6% серной кислоты и встряхивают 10 минут Встряхивание удобно производить посредством вибрационного аппарата Затем смесь центрифугируют в стерильной центрифужной пробирке в течение 20 минут при 3000 об/мин. Жидкость сливают, а осадок сеют Перед посевом осадок можно нейтрализовать 1—2 каплями 3% NaOH

Если для посева пользуются тканевым материалом, то его растирают в фарфоровой ступке, затем добавляют 5 мл 6% серной кислоты или 4% едкий натр, который способствует растворению растертых тканевых частиц. Через 20 минут смесь центрифугируют. После обработки едким натром надо осадок нейтрализовать 1—2 каплями 8% соляной кислоты.

Посев производится петлей или пастеровской пипеткой на поверхность питательной среды. Если посев производится на глицериновый картофель, то одновременно сеют в 5 пробирках. Материал распределяется по поверхности среды тонким слоем Чтобы не произошло высыхания посева, необходимо наличие в каждой пробирке 0,5 мл конденсационной воды, если ее нет, то приливают физиологический раствор С целью сохранения влажности посева ватные пробки пробирок заливают парафином. Для заливки парафином ватную пробку, держа за верхний конец, опускают нижним концом в нагретый до кипения парафин, пока из пробки выйдут пузырьки воздуха, затем этой пробкой затыкают пробирку. Можно сначала срезать верх ватной пробки ниже уровня отверстия пробирки на 3—4 мм, набрать пастеровской пипеткой жидкий парафин и сплошным слоем залить верх ватной пробки. Посев ставят в термостат при температуре 37—38°.

Начало роста наблюдается на 8—12-й день, а иногда и позже. Полное развитие происходит через 3—4 недели. Из полученных колоний делают мазки и проверяют их на наличие кислотоустойчивой палочки. Если в своем развитии колония оказывается атипичной, например резко окрашенной, быстрорастущей, гладкой и т. д, но при микроскопическом исследовании обнаруживается кислотоустойчивая палочка, то эту колонию следует пересеять для дальнейшего исследования, так как это могут быть либо авирулентные разновидности туберкулезных микробов, либо кислотоустойчивые сапрофиты.

Если через 6 недель после посева нет видимого роста, то следует сделать соскоб с поверхности среды и проверить с помощью микроскопа имеющиеся в соскобе кислотоустойчивые микробы, что свидетельствует о микроросте. В этих случаях следует взвесь из соскоба проверить на вирулентность биологической пробой, введя взвесь морской свинке.

Вирулентность туберкулезных микробов определяется посредством заражения морской свинки определенным количеством микробных тел. Дозу для заражения получают следующим способом. С поверхности питательной среды стерильно снимают культуру и отжимают ее между сложенным в несколько слоев листом стерильной фильтровальной бумаги до исчезновения влажности. Сухую бактериальную массу помещают во взвешенную пробирку. Взвешиванием устанавливают вес бактериальной мас?ы Затем стерильной стеклянной палочкой эту массу растирают, добавляя по каплям стерильный физиологический раствор. Всего добавляют столько миллилитров физиологического раствора, сколько имеется миллиграммов бактериальной массы. Морскую свинку заражают дозой 0,01 мг, для чего взвесь бактериальной массы разводят в 100 раз Заражение производят под кожу возле паха. Ведется наблюдение за развитием инфекции.

Культура сильной вирулентности через 60—80 дней вызывает гибель морской свинки от туберкулеза При средней вирулентности гибель наступает через 80—130 дней При слабовирулентной культуре заболевание до гибели подопытного животного может длиться около 1 года. При вскрытии тела погибшей морской свинки обнаруживается заболевание туберкулезом разных органов

Не ожидая гибели подопытного животного, можно намного раньше распознать заболевание туберкулезом. Для этого следует с 3—4-й недели после заражения произвести туберкулиновую реакцию Уже на 8—10-й день после заражения можно обнаружить увеличение и уплотнение лимфатических узлов. В результате бактериоскопического исследования пунктата этих узлов могут быть обнаружены туберкулезные палочки.

- Читать далее "Диагностика проказы. Выявление палочек Ганзена"