Выявить и определить численность аммонифицирующих бактерий в исследуемом образце почвы можно путем высева на мясопептонный бульон (МПБ). При этом учитываются бактерии, осуществляющие аммонификацию в аэробных условиях и при некотором ограничении доступа кислорода воздуха (чаще всего представители родов Pseudomonas, Bacillus; Proteus vulgaris, Escherichia coli).

Разложение белка микроорганизмами в процессе аммонификации всегда сопровождается образованием побочных продуктов: аммиака, который выделяется при дезаминировании аминокислот, сероводорода, освобождающегося при разрушении серосодержащих аминокислот, а также индола, который образуется при распаде триптофана. Кроме того, процесс аммонификации всегда сопровождается повышением щелочности среды.

Посев обычно производят из разведений от 10^-5 до 10^-10. Если исследуют сильно унавоженную почву, то для посева используют разведения от 10^-10 до 10^-15. В пробирки, содержащие по 8-10 мл МПБ, вносят по 1 мл из выбранных для посева разведений. Каждое разведение высевают в пятикратной повторности.

Две пробирки оставляют стерильными в качестве контроля при оценке роста. После внесения посевного материала между горлышком и пробкой каждой пробирки при помощи фламбированного пинцета укрепляют узкие стерильные полоски фильтровальной бумаги, пропитанные лакмусом и уксусно-кислым свинцом. При этом важно, чтобы бумага не соприкасалась с питательной средой.

Полоски бумаги предварительно стерилизуют, поместив их в чашку Петри или пробирку, в автоклаве при 0,5 атм. Пробки пробирок рекомендуется заворачивать в полиэтилен, чтобы затруднить улетучивание аммиака и H₂S. Посевы культивируют 5-7 сут. при 28-30 °С.

О росте аммонифицирующих бактерий свидетельствует помутнение среды, образование в ней хлопьев или осадка, наличие пленки на поверхности, выделение NH₃ и H₂S.

При образовании аммиака красный лакмус синеет. Выделение сероводорода обнаруживают по почернению бумаги вследствие образования сульфида свинца. Результаты регистрируют в сравнении со стерильным контролем.

Таким образом можно установить титр аммонифицирующих бактерий в исследуемой почве. При необходимости наиболее вероятное число амонификаторов в 1 г исходного субстрата рассчитывают с использованием таблиц Мак-Креди.

- Читать далее "Определение целлюлозолитиков в почве"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 29.09.2019