а) Определение аэробных целлюлозолитиков. В аэробных условиях целлюлозу гидролизуют миксобактерии, некоторые неспоровые и споровые бактерии, актиномицеты и грибы. Выявить и подсчитать аэробных целлюлозолитиков можно путем посева суспензий на силикагелевые пластинки, пропитанные средой Гетчинсона, в которой единственным источником углерода является клетчатка. Обычно посев производят из разведений 10^-1 и 10^-2. Каждое разведение высевают в пятикратной повторности.

Из фильтровальной бумаги вырезают диски такого размера, чтобы они свободно помещались на дно чашки Петри, и стерилизуют автоклавированием при 1 атм. На промытую силикагелевую пластинку в чашке Петри наносят 2-3 мл концентрированной среды Гетчинсона и 0,1 мл посевного материала. Внесенную жидкость равномерно распределяют по всей поверхности силикагеля шпателем. Затем фламбированным пинцетом на поверхность силикагеля помещают стерильный диск фильтровальной бумаги и слегка прижимают его новым стерильным шпателем.

Закрытые чашки Петри помещают во влажную камеру или в эксикатор над водой. Посевы культивируют 12-14 сут. при 28-30 °С.

Подсчитывают количество колоний, выросших на фильтрах в каждой чашке. Определяют количество аэробных целлюлозолитических микроорганизмов в 1 г почвы (расчет НВЧ описан в разделе об определении актиномицетов).

б) Определение анаэробных целлюлозолитиков. При ограниченном доступе кислорода воздуха целлюлозу разлагают в основном мезофильные и термофильные представители родов Clostridium и Bacillus. Посев обычно производят из разведений 10^-1, 10^-2 и 10^-3. Каждое разведение высевают в четырехкратной повторности.

Готовят среды для мезофилов и термофилов. Каждую среду разливают в высокие пробирки, заполняя их на 2/3 высоты. В каждую пробирку помещают по 4-5 полосок фильтровальной бумаги (5x1 см) и вносят мел — 0,5 г в среду для мезофилов и 1 г — в среду для термофилов. Затем среды стерилизуют при 1 атм.

В каждую пробирку вносят по 1 мл суспензии из разведений, выбранных для посева. Инокулированную среду для мезофилов инкубируют 18-20 сут. при 30 °С, а среду для термофилов —10-14 сут. при 60 °С.

При регистрации признаков роста о наличии целлюлозолитических микроорганизмов судят по характерному изменению фильтровальной бумаги. В таком случае бумага обычно слегка желтеет, покрывается слизью и постепенно превращается в рыхлую массу, состоящую из отдельных волокон. Кроме того, рост бактерий, разрушающих клетчатку, сопровождается помутнением среды и газообразованием. Таким образом можно установить титр анаэробных целлюлозолитических бактерий в исследуемой почве. При необходимости наиболее вероятное число микроорганизмов этой группы в 1 г исходного субстрата рассчитывают с использованием таблиц Мак-Креди.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 29.09.2019