Бартонеллезы необходимо дифференцировать от других заболеваний, сходных с ними по клиническим проявлениям.

Материалом для исследований является кровь больных или биоптаты. Bartonella выделяют при посеве крови больных или биоптатов на высокопитательные среды (сердечно-мозговой, колумбийский агары, агар на переваре Хоттингера с аминным азотом 1,5-1,6 г/л) с добавлением 5% крови, сыворотки. Центрифугирование лизированных эритроцитов увеличивает высеваемость бартонелл, так как при этом возбудитель высвобождается из клеток эритроцитов. Колонии, медленно вырастающие на плотной среде, имеют белый цвет с радужным оттенком, плотно прикреплены к поверхности агара. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают их и микроскопируют.

Диагностику можно также проводить, изучая морфологию клеток при микроскопии препаратов из материалов от больных (кровь, биоптаты и др.), окрашенных по Романовскому-Гимзе или с использованием методов серебрения по Warthin-Starry, Levadity. Аналогичным образом исследуют материал от животных и переносчиков.

Биохимические методы для идентификации малоспецифичны и трудоемки из-за использования сложных приборов (например, при проведении газо-жидкостной хроматографии для определения жирнокислотного состава).

а) Методы экспресс-диагностики. Наиболее быстрый и точный ответ (до 100%) в амбулаторных условиях получают при помощи ПЦР. При болезни кошачьих царапин ПЦР проводят с клиническими образцами из лимфоузлов после биопсии. Для исследований можно использовать амплификацию специфических генов этого микроорганизма, например, ftsZ (ген цитрат-синтазы), а также 16S-23S спейсерного участка (ITS). Вследствие вероятной неспецифической амплификации применение 16S рибосомальной /(НК ограничено. Преимущество использования ПЦР особенно проявляется в тех случаях, когда не удалось выделить возбудитель культуральными методами.

При идентификации бартонелл в исследовательских лабораториях используют также другие молекулярно-генетические методы. Например, для межвидовой гибридизации при наличии референс-штаммов бартонелл применяют ДНК-ДНК-гибридизацию.

б) Серологическая диагностика. Наиболее эффективными при диагностике бартонеллезной инфекции, помимо ПЦР, считаются серологические методы, при помощи которых положительные результаты получают в 2-2,5 раза чаще, чем при бактериологических исследованиях. Однако у больных с иммунодефицитом (например, у ВИЧ-инфицированных) можно получить ложноотрицательный ответ из-за низкого уровня антител.

Впервые при диагностике траншейной лихорадки в РНГА обнаружили IgM, IgG в более высоких титрах. В настоящее время чаще других реакций используют НРИФ, ИФА. Высокочувствительное специфическое тестирование в НРИФ основано на взаимодействии корпускулярного антигена бартонелл с антителами к группоспецифическим поверхностным белкам и липополисахаридам. Однако возможны перекрестные реакции с общими антигенами не только среди бартонелл, но и с Coxiella и Chlamydia. Так, серологическая дифференциация между В. quintana и В. henselae чаще всего невозможна. Родственный состав поверхностных липополисахаридов обусловливает перекрестные реакции между В. bacilliformis и С. psittaci.

Считается, что титр выявленных антител зависит от способа получения антигена. Например, с антигеном после смыва культуры бартонелл с плотной среды титры антител в сыворотках были на уровне 1:400-1:800. При выделении антигена из клеток бартонелл, выращенных на культуре ткани, титры антител в тех же сыворотках оказались 1:640-1:1250. При изучении клинических случаев бартонеллеза с использованием НРИФ диагностическим титром признали титр 1:64.

Диагностическим титром антител, выявляемых в ИФА для установления у больных траншейной лихорадки, считают 1:20-1:640. При этом титр IgG доминирует над титром IgM и, по мнению некоторых исследователей, должен быть не менее 1:100. Специфичность реакции установлена на уровне 99%.

В связи с высокой диагностической ценностью, доступностью, простотой и дешевизной серологические методы остаются наиболее распространенными. Однако для выявления бартонеллеза при помощи диагностических средств необходимы соответствующие диагностические препараты, пока отсутствующие в клинической практике.

К настоящему времени появились сообщения о создании за рубежом коммерческих высокоэффективных тест-систем для серологической диагностики некоторых видов бартонелл.

В Российском центре по риккетсиозам также разрабатывают препарат для диагностики болезни кошачьих царапин.

- Читать далее "Микоплазмы (Mycoplasma): таксономия"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 19.2.2020