Материалом для исследования, помимо пищи, являются рвотные массы, промывные воды желудка, фекалии и смывы с рук и носоглоток работающего персонала, персонала, участвующего в приготовлении пищи, и т.д.

У штаммов S. aureus, выделенных при пищевой стафилококковой интоксикации, выявляют наличие энтеротоксинов. Выявление СЭ, возможно несколькими методами: биологическими, иммунологическими, физико-химическими и молекулярно-генетическими.

Для обнаружения продукции СЭ выделенную культуру стафилококка засевают в специальные селективные питательные среды.

Для выделения S. aureus из пищевых продуктов Международной ассоциацией микробиологических обществ (1968) предлагаются использовать следующие среды: среда Фогель-Джонсона, теллурит-полимиксин-желточный агар, среда Бэйрд-Паркера, молочно-солевой агар.

Бактериологический метод, используемый для расследования пищевых отравлений стафилококковой этиологии, менее чувствителен, чем иммунологические методики ввиду того, что стафилококки могут погибнуть при тепловой обработке, а стафилококковые энтеротоксины могут содержаться в продукте. Кроме того, обнаружение S. aureus в материале еще не говорит о том, что он является причиной пищевого отравления, необходимо установить его способность продуцировать СЭ.

Бактериологический метод. Реакция плазмокоагуляции является ведущим диагностическим тестом, на котором основываются методы первичного типирования стафилококков. Наличие плазмокоагулазы используется как диагностический тест на возможность продукции энтеротоксина, однако не все коагулазоположительные штаммы продуцируют энтеротоксины, тогда как все штаммы, продуцирующие энтеротоксины, продуцируют коагулазу. Сочетание продукции энтеротоксинов и коагулазы наблюдается у значительного количества штаммов патогенных стафилококков.

В качестве дополнительных подтверждающих тестов идентификации S. aureus используют постановку реакции на термостабильную дезоксирибонуклеазу (ДНКазу), тест на наличие фермента кислой фосфатазы, лецитовителлазную реакцию.

Фаготипирование патогенных стафилококков также играет значительную роль в расследовании причин возникновения пищевых отравлении стафилококковой этиологии. Стафилококковые энтеротоксины в основном продуцируют штаммы стафилококков, относящихся к третьей фагогруппе.

В первый день для исследования пищевых продуктов готовят 10% взвесь асептически отобранной пробы в 0,1%-ной пептонной воде или физиологическом растворе. Из приготовленной взвеси и ее последующих десятикратных разведений производят посев по 0,1 мл на поверхность плотных элективных питательных сред и по 1 мл — в жидкую среду обогащения.

В качестве плотных элективных сред используют агар Бэйрд-Паркера, содержащий теллурит калия и куриный желток, а также молочно-солевой и желточно-солевой агары.

В качестве среды обогащения используют солевой мясопептонный питательный бульон.

Посев материала от людей, подозреваемых на пищевое отравление, производят прямо на поверхность указанных плотных сред в чашки Петри по 0,1 мл.

Второй день выделения S. aureus (через 23-48 ч). Просматривают посевы на плотных средах в чашках Петри. На среде Бэйрд-Паркера стафилококки вырастают в виде черных блестящих колоний (за счет восстановления теллурита в теллур) диаметром 1,0-1,5 мм с зонами просветления среды шириной 0,5-3,0 мм (за счет лецитиназы) в виде опалесценции вокруг колонии. Из типичных колоний готовят препараты-мазки, окрашенные по Граму, и микроскопируют их. При обнаружении в препаратах кокков, сходных со стафилококками, производят отсев на желточный агар не менее 5 колоний, инкубируют в термостате 18-24 ч для дальнейшего изучения.

Чашки Петри с 24-часовым ростом сохраняют в термостате еще 1 сутки (для окончательного подсчета числа выросших колоний стафилококка).

Из сред обогащения производят пересев петлей на поверхность одной из вышеназванных плотных селективных сред, инкубируют в течение 24-48 ч и выросшие колонии также изучают.

Третий день. Производят подсчет выросших при первичном посеве колоний стафилококков из последних разведений, пересчитывают их на 1 г/мл (продукта). Количественный учет стафилококков, выросших при посеве материала от больных, не производят.

Проверяют в мазках, окрашенных по Граму, чистоту выделенных на питательном агаре культур, изучают в тестах на наличие ферментов — плазмокоагулазы, термостабильной ДНКазы, лецитиназы, кислой фосфатазы, ферментации маннита. Проводят фаготипирование при помощи 22 фагов Международного набора для проведения эпидемиологического маркирования с целью выявления источников инфекций при анализе материала от больных, а также определяют чувствительность стафилококков к антибиотикам методом диффузии в агаре при помощи стандартных дисков.

Все выделенные плазмокоагулирующие штаммы S. aureus тестируются на наличие СЭ иммунологическими методами. Штаммы S. saprophyticus не продуцируют энтеротоксины, а некоторые штаммы S. intermedius, S. hyicus, S. epidermidis могут продуцировать СЭ.

- Читать далее "Методы определения стафилококковых энтеротоксинов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 11.11.2019