Микробиологическая диагностика шигелл (Shigellae)

Качество лабораторной диагностики во многом зависит от правильного сбора материала для исследования и посева его на соответствующие среды. Материалом для исследования служат фекалии. Посев на элективные дифференциально-диагностические среды (среду Плоскирева, агар Мак-Конки и др.) лучше производить у постели больного. Засеянные чашки сразу же отправляют в лабораторию. Для посева отбирают частицы кала, содержащие слизь и гной. В качестве среды обогащения используют только жидкую селенитовую среду.

Первый день. Фекалии засевают на дифференциально-диагностические среды (Плоскирева, Левина, Мак-Конки и др.) в чашках Петри. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 18-20 ч.

Второй день:

1. Просматривают чашки, засеянные накануне. Отбирают подозрительные колонии для дальнейшего исследования. На указанных выше питательных средах шигеллы образуют небольшие (до 1,5 мм в диаметре) бесцветные нежные слегка выпуклые колонии. S. sonnei могут образовывать наряду с описанными и более крупные плоские с неровным краем колонии.

2. Отобранные колонии петлей засевают в пробирку с полужидким агаром для определения подвижности (под пробку помещают индикаторную бумажку для определения индола), в пробирку со средой Клиглера (не забыть проколоть нескошенную часть среды — столбик), в среду с мочевиной по Преусу в пробирке, в пробирку с нитратным агаром Симмонса, на среду Кларка.

3. Производят высев со среды обогащения на среду Плоскирева. Все посевы инкубируют в термостате при 37°С в течение 18-20 ч.

Третий день:

1. Просматривают чашки с посевами среды накопления. Отбирают подозрительные колонии и засевают на тот же ряд сред, что и с первичного посева во второй день.

2. Учитывают результаты посева для определения ферментативных свойств, сделанного на второй день. Неподвижные, ферментирующие глюкозу с образованием кислоты (некоторые биотипы S. flexneri 6 расщепляют глюкозу до кислоты и газа), не ферментирующие лактозу (следует помнить, что среди S. sonnei встречаются биохимические варианты, замедленно ферментирующие лактозу до кислоты), не образующие сероводорода, не гидролизующие мочевину, не утилизирующие цитрат в качестве единственного источника углерода, дающие положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную Фогеса-Проскауэра подозрительны на шигеллы.

3. Для окончательной идентификации исследуемые культуры засевают в среду с лизином, ацетатный агар, среды Гисса с маннитом, ксилозой, рамнозой, мальтозой, а также в пробирку со скошенным агаром для последующего серологического типирования. Все посевы помещают в термостат при 37°С на 18-20 ч.

Четвертый день:

1. Учитывают результаты посевов, сделанных накануне, и окончательно идентифицируют выделенные культуры по биохимическим свойствам.

2. Культуры, биохимические свойства которых соответствуют характеристике шигелл, типируют в реакции агглютинации на стекле сначала со смесью № 1 (поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера и Зонне), а при отрицательной реакции — с набором поливалентных сывороток к другим видам шигелл.

В случае выявления положительной реакции с одной из поливалентных сывороток типирование продолжают с адсорбированными моновалентными сыворотками, при выделении шигелл Флекснера — с типовыми и групповыми сыворотками.

По результатам изучения биохимических свойств и серологического типирования выдают ответ о выделении определенного вида шигелл.

Биохимические свойства шигелл можно определить при помощи тест-систем API 20Е, «Enterotube», «Pato Тек», MMEI и ММЕП и др., выпускаемых за рубежом и в нашей стране.

Основным методом лабораторной диагностики дизентерии является бактериологический. В некоторых случаях для серодиагностики можно использовать реакцию пассивной гемагглютинации с эритроцитарными диагностикумами из S. flexneri и S. sonnei. Антитела к возбудителю в сыворотке крови больных появляются на 5-8-й день болезни, достигая максимума на 2-3-й неделе.

В настоящее время все чаще стали использовать ПЦР и разные иммунологические методы для обнаружения последовательностей ДНК и специфических шигеллезных антигенов в материале (ИФА, иммунофлюоресцентный метод), позволяющие подтвердить диагноз в первые дни заболевания.

- Читать далее "Иерсинии (Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica): морфологические, тинкториальные свойства"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 30.12.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.