Определение Clostridium perfringens в почве

Обнаружение С. perfringens на железосульфитном агаре основано на выявлении способности этого микроорганизма восстанавливать тиосерно-кислый натрий (Na2S2O3) до сернистого натрия (Na2S), который, взаимодействуя с хлорным железом, приводит к образованию сернистого железа (FeS), имеющего черный цвет.

Для удаления вегетативных форм почвенные разведения прогревают при 75(±5)°С в течение 20 мин. Из всех приготовленных почвенных разведений (до 10-6) по 1 мл вносят в два параллельных ряда пробирок. Затем в каждую пробирку осторожно по стенке, избегая образования пузырьков воздуха, вливают по 9-10 мл железосульфитного агара (среда Вильсона-Блер), приготовленного ex tempore и прогретого до 70-80 °С.

Вращением пробирки между ладонями равномерно распределяют посевной материал в питательной среде и быстро опускают в холодную воду для немедленного охлаждения и удаления воздуха из среды. Посевы культивируют 16-18 ч при 44(±1) °С.

При наличии в исследуемой пробе С. perfringens в толще агара вырастают достаточно крупные черные колонии, нередко разрывающие среду вследствие газообразования. Из характерных колоний делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и вычисляют перфрингенс-титр.

Клетки С. perfringens — подвижные (реже неподвижные) короткие толстые палочки с закругленными концами. Образуют овальные или круглые эндоспоры, расположенные центрально и придающие клеткам веретенообразную форму (споры также могут располагаться терминально и субтерминально).

В мазках расположены одиночно, попарно, в виде цепочек или штакетообразных (параллельно друг к другу) скоплений, грамположительны, каталаза-отрицательны. Для выявления наличия каталазы колонию извлекают из питательной среды и помещают на чистое предметное стекло, затем после 30 мин выдержки на воздухе наносят на нее пипеткой каплю 3% раствора перекиси водорода. Если через 30-60 с на стекле появляются пузырьки газа, то считают, что микроорганизмы образуют каталазу.

Титр определяют по предельному разведению почвенной суспензии, дающему рост С. perfringens.

Определение С. perfringens в почве можно также проводить методом мембранных фильтров (описан в разделе, посвященном определению спор сульфитредуцирующих клостридий в воде).

Важно отметить, что С. perfringens образуют характерные черные колонии на среде Вильсона-Блер достаточно быстро (через 2-18 ч после посева). В более поздние сроки такую же картину могут давать и другие анаэробы.

- Читать далее "Определение токсичности почв по отношению к микроорганизмам"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.10.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.