а) Определение протеев в почве. При исследовании почвы на наличие протеев готовят разведения исходной почвенной суспензии вплоть до 10^-4. Из каждого разведения стерильной пипеткой отбирают 1 мл в вносят в конденсационную воду свежескошенного МПА (посев по методу Шукевича).

При этом очень важно не загрязнить поверхность питательной среды вносимой почвой. Посевы культивируют в течение 48 ч при 37(±1)°С. Протей обнаруживают в виде тонкой вуалеобразной голубовато-дымчатого цвета пленки (феномен роения) на поверхности среды.

Рост сопровождается характерным гнилостным запахом. Протеи представляют собой грамотрицательные, прямые подвижные палочки с закругленными концами. Спор и капсул не образуют. Склонны к полиморфизму, наблюдаются кокковидные и нитевидные формы.

б) Определение коли-фагов. В качестве тест-культуры используется фаголизабельный штамм (Е. coli К12 Str®). Подготовка тест-культуры описана в разделе, посвященном определению коли-фагов в воде.

1. Подготовка пробы для исследования. Исходную почвенную суспензию (или ее разведения) энергично встряхивают 10-15 мин (вручную или с использованием специального аппарата), затем центрифугируют 15 мин при 4000 об/мин. Отбирают 10 мл супернатанта, устанавливают pH 7,0. Для освобождения от бактерий добавляют 1 мл хлороформа, интенсивно встряхивают и оставляют на 15 мин для осаждения хлороформа.

2. Выявление коли-фагов (метод агаровых слоев). В чашки Петри разливают МПА, содержащий 1,5 % агар-агара, после чего чашки подсушивают. На поверхность среды в двух чашках Петри высевают по 1 мл надосадочной жидкости из подготовленной пробы. В пробирки, содержащие по 3 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С МПА (1,5 % агар-агара), вносят по 0,2 мл смыва суточной или 0,4 мл 4-часовой бульонной культуры Е. coli К12 Str® и тщательно перемешивают. Затем содержимое этих пробирок аккуратно наслаивают на поверхность засеянного пробой МПА.

Для контроля тест-культуры на лизогенность 0,1 мл смыва суточной (или 0,2 мл 4-часовой бульонной) культуры Е. coli К12 Str® вносят в стерильную чашку Петри и заливают 15-20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С МПА (1,5% агар-агара).

После застывания все чашки переворачивают и инкубируют в течение 18-24 ч при 37(±0,1)°С.

3. Учет результатов. Просмотр посевов проводят в проходящем свете. Проба считается положительной при наличии полного лизиса, появлении одной или нескольких бляшек просветления на чашках с пробой почвы. При этом обязательно полное отсутствие зон лизиса в чашке с контролем.

Для количественного определения коли-фагов подсчитывают число БОЕ на двух чашах, делят на 2 и умножают на степень разведения. Результат выражают количеством БОЕ на 1 г почвы.

- Читать далее "Определение Clostridium perfringens в почве"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.10.2019