Этот показатель используется для быстрого получения ориентировочных данных о способности почвы самоочищаться от патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов. Низкая степень токсичности почвы свидетельствует о наличии в ней условий для выживания болезнетворных микроорганизмов.

а) Качественный метод. На половине дна стерильной чашки Петри ровным слоем распределяют 10 г хорошо перемешанной и просеянной почвы. Чашку маркируют в соответствии с номером почвенного образца и видом используемого в данном случае тест-организма. Затем чашку переносят в бокс, устанавливают на ровной поверхности и заливают 10 мл расплавленного и остуженного голодного агара (содержит 1,5% агар-агара) так, чтобы слой почвы был покрыт агаром. После застывания голодного агара в чашку вносят 10 мл расплавленной и остуженной питательной среды, пригодной для выбранного тест-организма.

Из одного почвенного образца, таким образом, готовят по две параллельные чашки для каждого тест-организма. После высушивания подготовленных чашек под бактерицидными лампами в течение 30 мин производят посев индикаторных штаммов микроорганизмов. В качестве контроля засевают те же культуры па соответствующие среды, но без добавления почвы. Условия культивирования подбирают в зависимости от потребностей тест-культур.

При учете результатов прежде всего просматривают контрольные посевы. Адекватная оценка токсичности почвы возможна только в том случае, когда в контроле наблюдается хорошо выраженный равномерный рост индикаторных микроорганизмов по всей поверхности среды. При соблюдении указанного выше условия, просматривают остальные чашки с посевами.

Выросшие колонии идентифицируют по характерным признакам. Рост тест-микроорганизмов только на поверхности той части среды, под которой нет почвы, указывает на токсичность (Т) исследуемой почвы. Если наблюдается частичное ингибирование роста, то говорят о маловыраженной токсичности (М/Т).

б) Качественно-количественный метод. Равномерно распределяют 10 г почвы по всей поверхности дна стерильной чашки Петри. Затем в чашку заливают 10 мл расплавленного и остуженного голодного агара (содержит 1,5 % агар-агара) так, чтобы покрыть почву. После застывания голодного агара на него наслаивают 10 мл расплавленной и остуженной питательной среды, пригодной для выбранного тест-организма. На поверхность застывшей питательной среды помещают подготовленный мембранный фильтр, создавая, таким образом, дополнительный барьер между почвой и тест-организмом.

Мембранные фильтры подготавливают для теста следующим образом: на матовую поверхность фильтра простым карандашом наносят 16 точек, после чего фильтр стерилизуют кипячением. Фильтры укладывают на питательную среду матовой поверхностью вверх. В каждую чашку можно поместить от 1 до 4 фильтров.

На поверхность фильтра в местах, отмеченных точками, производят посев индикаторного микроорганизма. Посев осуществляют бактериологической петлей (иглой) из культуры тест-организма, суспендированной в изотоническом растворе NaCl (плотность суспензии 10⁸ клеток в 1 мл устанавливают по оптическому стандарту мутности). Для посева можно также использовать специальный штамп, который представляет собой металлический диск диаметром около 30 мм с 16 стальными одинаковыми иглами.

Суспензию тест-организма наливают в стерильную чашку Петри, затем погружают в нее кончики игл стерильного штампа, при помощи которого впоследствии производят одновременный посев в 16 точках на мембранном фильтре. Условия культивирования подбирают в зависимости от потребностей тест-культур.

Учет результатов осуществляют, подсчитывая колонии, выросшие на фильтрах в точках посева. Процент пророста (Р) рассчитывают как отношение количества выросших колоний к количеству посевов. Токсичность почвы (Т) определяют по формуле: Т = 100 - Р. Абсолютное отсутствие роста на фильтрах свидетельствует об абсолютной токсичности почвы. Если на метках всех посевов вырастают колонии тест-организма, то констатируют отсутствие токсичности.

- Читать далее "Определение сальмонелл и шигелл в почве"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.10.2019