Выбор метода в данном случае зависит от предполагаемой степени фекального загрязнения исследуемой почвы. Обычно при анализе почв с невысокой степенью загрязнения используют титрационный метод, причем питательные среды, используемые, например, при аналогичном анализе воды, в данном случае не совсем пригодны.

Это связано с тем, что разнообразные почвенные микроорганизмы, активно развиваясь на этих средах, могут подавлять рост кишечной палочки или вызывать газообразование независимо от ее присутствия. Поэтому при исследовании почвы более целесообразно применять питательные среды, содержащие вещества, подавляющие рост грамположительных бактерий, но не мешающие при этом росту колиформных бактерий (генциан фиолетовый, 2-,3-,5-трифенил-тетразолий-хлорид (ТТХ) и пр.).

В качестве ускоренного метода при исследовании малозагрязненных почв также можно использовать метод мембранной фильтрации. Если анализу подвергаются почвы с высокой степенью загрязнения, часто проводят прямой посев разведений исследуемого образца на поверхность среды Эндо.

а) Титрационный метод. Из первоначального почвенного разведения (1:10) стерильной пипеткой отбирают 10 мл (соответствует 1 г исследуемой почвы) и засевают во флаконы с 50 мл среды Кесслера. Посев меньших количеств (0,1; 0,01 г и т. д.) производят по 1 мл из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9 мл тех же сред. При анализе чистых почв посев производят из основного почвенного разведения до 10^-3.

Если исследуют загрязненные почвы, — до 10^-6. Посевы культивируют при 37(±1)°С в течение 24 ч. При отсутствии признаков роста посевы оставляют при 37(±1) °С еще на 24 ч. Отсутствие газообразования и помутнения среды после 48 ч инкубации позволяет дать окончательный ответ об отсутствии колиформных бактерий в исследуемой пробе.

При наличии в посевах признаков роста (газообразование, помутнение) производят высев на среду Эндо. Чашки с посевами инкубируют 18-24 ч при 37(±1) °С. Отрицательный ответ выдают при отсутствии роста на чашках. Если в наличии имеются колонии, типичные для колиформных бактерий (розовые, красные, малиновые с металлическим блеском или без него), из них готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Грамотрицательные палочки из изолированных колоний исследуют в оксидазном тесте (см. раздел об определении колиформных бактерий в воде).

Положительный ответ выдают при наличии грамотрицательных оксидазоотрицательных палочек. Результаты анализа можно выразить титром колиформных бактерий (наименьшее количество почвы в граммах, в котором обнаруживаются колиформные бактерии).

Если, кроме прочего, необходимо выявить наличие БГКП, то дополнительно производят посев выделенных грамотрицательных оксидазоотрицательных палочек на полужидкую среду с глюкозой. Посевы инкубируют при 37(±1) °С в течение 24 ч. Появление в среде кислоты и газа подтверждает наличие БГКП в исследуемом разведении почвы.

б) Метод мембранной фильтрации. Этот метод позволяет сократить время анализа на 2 сут. благодаря исключению этапа накопления в жидких средах. Подготовка фильтровального аппарата, собственно фильтрование и перенос фильтров на среду Эндо ничем не отличаются от таковых при исследовании воды (см. соответствующий раздел). При исследовании чистых почв фильтруют по 1 мл почвенной суспензии из разведений 10^-1; 10^-2; 10^-3, при исследовании загрязненных — 10^-3; 10^-4; 10^-5.

Фильтры после окончания фильтрования помещают на поверхность среды Эндо с добавлением розоловой кислоты. В дальнейшем ход исследования аналогичен таковому для воды (см. статьи на сайте посвященные исследованию воды).

в) Метод прямого посева. При анализе загрязненных почв можно провести прямой поверхностный посев почвенной суспензии в количестве ОД или 0,5 мл на среду Эндо (используют разведения до 10^-6). Если анализируют сравнительно чистые почвы, засевают почвенную суспензию до разведения 10^-3 включительно. Посевной материал тщательно равномерно распределяют по всей поверхности среды Эндо стеклянным шпателем. Посевы культивируют при 37(±1)°С в течение 24 ч. В дальнейшем поступают с ними так же, как и на соответствующем этапе исследований при использовании титрационного метода.

Подсчитывают количество колиформных бактерий в 1 г почвы. Результат анализа также можно выразить индексом колиформных бактерий.

- Читать далее "Определение энтерококков в почве"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.10.2019