а) Приготовление мазка и окраска по Граму в модификации Г.П.Калины. Применяется для дифференциации микроорганизмов, слабо или неравномерно воспринимающих анилиновые красители (для нейссерий, гемофилов, пневмококка и др.).

На обезжиренное стекло наносят каплю воды; в ней суспендируют изучаемую культуру и вносят каплю спиртового раствора бриллиантового зеленого, смесь размазывают тонким слоем (диаметр мазка 1,0 см). После высыхания препарат фиксируют над пламенем, затем на него наливают основной раствор на 1,5-2,0 мин, после чего раствор сливают и стекло в наклонном положении промывают водой.

Далее препарат в наклонном положении промывают 30%-ным раствором этилового спирта (до отхождения облачков краски), после чего немедленно промывают водой. Затем производится докрашивание препарата водным раствором фуксина Пфейффера в течение 2 мин, окончательная промывка водой и просушивание уголком фильтровальной бумаги.

При микроскопии грамотрицательные бактерии выглядят ярко розовыми, грамположительныезеленовато-черными или темно-фиолетовыми. Желательно для контроля на каждом стекле делать мазки из культур Staphylococcus spp. и Е. coli.

б) Окраска по Цилю и Нельсену (для выявления кислотоустойчивых микобактерий):

1. Реактивы:
Феноловый раствор основного фуксина
25-%-ный раствор серной кислоты H₂SO₄ и/или
3%-ный солянокислый спирт
0,3%-ный водный раствор метиленового синего

Для приготовления 25%-ного раствора серной кислоты к 75,0 мл дистиллированной воды осторожно добавляют 25,0 мл концентрированной серной кислоты, постепенно наслаивая ее по стенкам сосуда, и аккуратно перемешивают содержимое.

Для приготовления 3%-ного солянокислого спирта к 97,0 мл 96%-ного этилового спирта в колбе добавляют пипеткой 3,0 мл концентрированной соляной кислоты HCl путем осторожного наслаивания по стенкам колбы.

2. Окрашивание. На фиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги, обильно смоченную феноловым раствором основного фуксина и подогревают на пламени до отхождения паров, после чего выдерживают 5 мин. Затем пинцетом снимают бумагу и выбрасывают ее в дезинфицирующий раствор, а стекло осторожно промывают струей проточной воды. Затем на окрашенный мазок наливают для обесцвечивания 25%-ный раствор серной кислоты H₂SO₄ или 3%-ный солянокислый спирт и держат до визуального обесцвечивания препарата (до 3-х мин), после чего его снова споласкивают водой и докрашивают 0,3%-ным водным раствором метиленовой сини 1 мин. Препарат промывают водой, высушивают на открытом воздухе в вертикальном или наклонном положении.

При микроскопии кислотоустойчивые бактерии окрашены в малиново-красный цвет, а другие микроорганизмы и клеточные элементы — в голубой.

- Читать далее "Простые среды для культивирования бактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 23.2.2020