а) Среда BSK (Barbour-Stoenner-Kelly). Состав:

1. Раствор А:
Тканевая среда х10 CMRL 1066 с глютамином — 100,0 мл Протеозный пептон №2 (Proteose peptone) — 5,0 г
Триптон (Proteose tryptone) — 1,0 г
Экстракт дрожжей (Proteose yeastolate) — 1,0 г
HEPES - 6,0 г
Лимоннокислый натрий — 0,7 г
Глюкоза (alpha-, D+) — 3,0 г
Пируват натрия — 0,8 г
N-ацетил-О-глюкозамин — 0,4 г
Хлористый магний (MgCl₂*6H₂O) — 0,3 г
L-глутамин — 0,1 г
Бикарбонат натрия — 2,2 г
Бидистиллированная вода, стерилизованная фильтрацией — 900,0 мл

Медленно размешивают при 4-10°С в течение 3 ч, доводят pH до 7,6 при помощи 5М раствора NaOH. Стерилизуют фильтрацией через стерильный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

2. Раствор Б. В 200,0 мл бидистиллированной воды, прогретой до 50°С, растворяют 14,0 г желатина. Автоклавируют 15 мин при 115°С (или 15 мин при 1,5 атм).

3. Раствор В. 50,05 г бычьего сывороточного альбумина (фракция V) растворяют в 143,0 мл бидистиллированной воды или используют готовый раствор бычьего сывороточного альбумина («Sigma») — 143,0 мл 35%-ного раствора бычьего сывороточного альбумина, соответственно.

4. Раствор Г. Кроличья сыворотка, инактивированная — 86,0 мл. Соединяют нагретые до 37°С растворы А, Б, В и Г. Полученную теплую среду стерилизуют фильтрацией под давлением через нитроцеллюлозный фильтр с размером пор 0,2 мкм. Раствор Б также можно добавлять после фильтрации.

В качестве альтернативы возможно дополнение коммерческой среды BSK-H «Sigma» растворами Б и Г, как описано выше, и 100 мг/л L-глутамином из отдельного автоклавированного хранящегося раствора. Полученную смесь стерилизуют теплой (при 37°С) путем фильтрации.

Хранят среду при 4°С не более 1 мес. Герметически завинчивающиеся культуральные емкости (пробирки, флаконы) следует заполнять средой на 9/10 объема, при этом использование анаэростатов или иных специальных приспособлений при культивировании необязательно.

б) Среда BSK-H коммерческая, «Sigma». Среда BSK-H — комплексная среда, разработанная для выращивания спирохеты B.burgdorferi.

- Читать далее "Среды для культивирования лептоспир"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 5.3.2020