а) Среда Фервоорта-Вольфа в модификации С.И.Тарасова. Состав:
Дистиллированная вода — 900,0 мл
Хлористый натрий (NaCl) — 0,5 г
Фосфатная буферная смесь Зоренсена (pH = 7,2) — 100,0 мл

Смесь в колбе автоклавируют при 120°С в течение 30 мин. На другой день после автоклавирования жидкость дважды фильтруют через двуслойный бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5,0 мл. Среду в пробирках вновь автоклавируют при 120°С в течение 30 мин. По охлаждении все пробирки, в которых обнаружена муть или осадок, выбраковываются.

В серии пробирок с прозрачным содержимым выборочно проверяют pH. Для посевов используют среду с pH 7,2-7,6. В пробирки с прозрачной средой добавляют по 0,5 мл инактивированной (при 56°С в течение 30 мин в водяной бане) кроличьей сыворотки. Затем следует 2-кратное прогревание среды в водяной бане при 56°С в течение 30 мин. Проверяют стерильность: выдерживают среду в термостате при 37°С в течение суток.

б) Твин-альбуминован среда. Основные растворы. Растворяют следующие ингредиенты (в 100,0 мл дистиллированной воды каждый):
NH₄Cl - 25,0 г
ZnSO₄ • 7Н₂O - 0,4 г
MgCl₂ • 6Н₂O и СаС1₂ • 2Н₂O — по 1,5 г каждый
FeSO₄ • 7Н₂O - 0,5 г
пируват натрия — 10,0 г
глицерин — 10,0 г
твин-80 — 10,0 г
тиамин-HCl — 0,5 г
цианкобаламин — 0,02 г

Раствор FeSO₄ • 7Н₂O должен быть свежеприготовленным и прозрачным. Приготовление альбуминовой добавки: 10,0 г бычьего сывороточного альбумина (V фракция) растворяют в 50,0 мл дистиллированной воды, размешивают на магнитной мешалке, добавляя следующие растворы: CaCl₂-MgCl₂ — 1,0 мл; FeSO₄ — 10,0 мл; цианкобаламин — 1,0 мл; твин-80 — 12,5 мл. pH доводят до 7,4 и добавляют дистиллированную воду до конечного объема 100,0 мл.

Альбуминовую добавку стерилизуют фильтрацией. Приготовление основы среды: к 996 мл дистиллированной воды добавляют: Na2HPO^ (обезвоженный) — 1 г; К₂НРО₄ (обезвоженный) — 0,3 г и NaCl — 1,0 г. Затем добавляют следующие растворы: NH₄Cl — 1,0 мл; тиамин — 1,0 мл; пируват натрия — 1,0 мл и глицерин — 1,0 мл. pH основы среды доводят до 7,4, а затем стерилизуют автоклавированием при 121°С в течение 20 мин.

Приготовление жидкой теин-альбуминовой среды:1 объем альбуминовой добавки смешивают с 9 объемами основы среды при соблюдении асептики.

Один из вариантов твин-альбуминовой среды (коммерческое название -EMJFI) выпускается фирмой «Difco».

в) Агаризованные среды для культивирования лептоспир:

А. Агаризованная среда Фервоорт-Вольфа. Перед автоклавированием жидкой основы к ней добавляют, в зависимости от цели, 0,2 или 1% агара. Агар растворяют при медленном подогревании.

Перед употреблением к охлажденной стерильной агаровой основе добавляют стерильно кроличью сыворотку, соблюдая режим, указанный для среды Фервоорт-Вольфа.

Б. Агаризованная теин-альбуминовая среда. К готовой питательной основе твин-альбуминовой среды перед стерилизацией добавляют, в зависимости от цели, 0,2 или 1% агара, растворяют агар при медленном подогревании и автоклавируют. Перед употреблением в среду вносят стерильно альбуминовую добавку.

г) Среда с 8-азогуанином для дифференциации лептоспир. Среду готовят на одной из жидких питательных основ (Фервоорт-Вольфа или твин-альбуминовой); она содержит 225 мкг/ мл 8-азогуанина.

Растворяют 0,1 г 8-азогуанина в 50,0 мл жидкой основы до ее стерилизации. Добавляют 2,0 мл 2М раствора едкого натра (NaOH). Растворяют при подогревании с покачиванием. Доводят pH смеси до 7,4 при помощи 1М раствора гидрохлорида НС1. Доливают исходную жидкую основу до общего объема 500,0 мл. Разливают в пробирки по 5,0 мл, автоклавируют при 120°С 20 мин. Дальнейшее приготовление среды ведется в соответствии с использованной основой.

- Читать далее "Среды для выделения и культивирования легионелл"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 5.3.2020