Применяется в практической микробиологии преимущественно для внутриродовой дифференциации стафилококков. Является одним из наиболее достоверных признаков патогенности.

а) Тест основан на свертывании плазмы в результате продукции плазмокоагулирующим возбудителем тромбиноподобного вещества. Известны две формы плазмокоагулазы:
• связанная с клеточной стенкой микроорганизма;
• находящаяся в клетке в свободном виде.

Связанная коагулаза, или «хлопьеобразующий фактор» (clumping factor, англ.), воздействует непосредственно на фибриноген плазмы, вызывая склеивание бактерий. Свободная коагулаза действует на протромбин, способствуя образованию тромбиноподобного продукта, который, вступая во взаимодействие с фибриногеном, образует сгусток фибрина. Тест определения свободной коагулазы воспроизводится пробирочным методом. «Хлопьеобразующий фактор» определяют в слайд-тесте, который в 96% случаев совпадает с пробирочным тестом.

Для постановки теста необходимо иметь:
1) исследуемую суточную культуру на плотной питательной среде;
2) плазму крови кролика;
3) изотонический раствор натрия хлорида.

Можно использовать коммерческую сухую кроличью плазму с цитратом натрия или EDTA (этилендиамин-тетрауксусная кислота) или нативную плазму, получаемую в лабораторных условиях.

б) Получение нативной кроличьей плазмы. В стерильную пробирку с 1 мл 5%-ного раствора натрия цитрата добавляют 9 мл крови, полученной из сердца или краевой вены уха кролика. Пробирку с кровью для осаждения эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин или ставят на 18-20 ч в холодильник. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой желтоватой жидкости — плазма, свободная от эритроцитов. Ее асептически отсасывают и разливают по 0,5 мл в агглютинационные пробирки. В холодильнике пробирки с плазмой могут храниться 10 дней; в замороженном состоянии — несколько месяцев.

в) Техника постановки реакции плазмокоагуляции на «хлопьеобразующий фактор» в слайд-тесте (на стекле). На предметное стекло наносят 1 каплю неразведенной кроличьей плазмы и тщательно суспендируют в ней материал исследуемой бактериальной колонии. Результат реакции учитывают в течение ближайших 10 с. Наиболее подходящей для постановки слайд-теста является плазма человека, которую получают из донорской крови, обработанной так же, как и кровь кролика.

При положительном результате в однородной бактериальной суспензии образуются хлопья, которые при попытке гомогенизировать их бактериальной петлей не разрушаются и не исчезают.

Положительный контроль: Staphylococcus aureus.

Отрицательный контроль: S. epidermidis, S. saprophyticus.

Наиболее подходящей для постановки слайд-теста является плазма человека.

г) Техника постановки пробирочного теста реакции плазмокоагуляции. В пробирку с 0,5 мл неразведенной кроличьей плазмы вносят колонию испытуемого штамма стафилококка. Засеянные пробирки инкубируют в термостате при температуре 35(±1)°С до 24 ч. Наблюдение за посевами и учет результатов проводят через 1, 2 и 4 ч. Время наступления плазмокоагуляции соответствует уровню ферментативной активности микробов. При положительном результате реакции жидкость превращается в желеобразную массу или сгусток, который не разрушается при легком встряхивании пробирки.

При появлении сгустка через 2-4 ч от начала реакции пробирки вынимают из термостата и оставляют при комнатной температуре во избежание растворения его за счет стафилокиназоподобной активности исследуемой культуры стафилококка.

Если в течение первых 4 ч сгусток не образовался, посевы оставляют в термостате на 24 ч для окончательного учета результатов реакции.

д) Примечание. Ложноотрицательные результаты плазмокоагуляции возможны в случае, если исследуемый штамм стафилококка продуцирует большое количество стафилокиназы, которая может растворить сгусток фибрина до учета реакции.

- Читать далее "Тест на определение подвижности бактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 21.2.2020