Источником серы — одного из важнейших химических элементов, необходимых для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов, служат серосодержащие аминокислоты — цистеин, цистин, метионин, а также неорганические соединения серы (сульфаты и тиосульфаты).

Для того чтобы сульфаты и тиосульфаты вступали в реакцию биосинтеза, микроорганизмам необходимо восстановить их до сероводорода (H₂S) — газообразного токсического соединения с резким неприятным запахом тухлых яиц. Этот процесс катализируют сульфатредуктазные энзимы, продуцируемые многими энтеронатогенными и другими группами патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

а) Тест основан на культивировании испытуемого микроорганизма на питательных средах, ингредиентами которых являются источники H₂S (серосодержащие аминокислоты или неорганические соединения серы — сульфаты и тиосульфаты), способные к ферментативному высвобождению сернистых соединений.

Процесс образования H₂S происходит в кислой среде, и для его выявления необходим соответствующий индикатор (соли железа или свинца), с которыми H₂S вступает в соединение, в результате чего образуется коричнево-черный преципитат — сульфат железа или сульфат свинца.

б) Техника постановки теста:

Вариант 1 — выявление сероводорода на плотных питательных средах Клиглера, TSI, Олькеницкого. Суточную культуру испытуемого микроорганизма высевают в пробирку со скошенным столбиком одной из этих дифференциально-диагностических сред. Среды предназначены для одновременного определения сахаролитических свойств микроорганизма и способности его образовывать сероводород. Посев культур производят уколом в столбик среды и штрихом на скошенную его часть.

Для обнаружения сероводорода в состав среды вводят индикатор — сульфат железа (II) FeSO₄ • 7H₂O. В период накопления кислых продуктов в столбике агара бактерии, образующие сероводород в анаэробных условиях, начинают активно продуцировать фермент сульфатредуктазу, восстанавливающий неорганические тиосульфаты в сульфиты с выделением сероводорода.

Реакция происходит без каких-либо внешних проявлений. Обнаружение ее возможно только после того, как сероводород вступит в реакцию с индикатором сульфатом железа (II), результатом которой явится образование сульфида железа FeS — преципитата черного цвета, о чем свидетельствует образование в столбике среды преципитата черного цвета.

Вариант 2 — тест на определение сероводорода с применением индикаторной бумаги. Вариант постановки сероводородного теста, основанный на использовании бумажных индикаторных полосок, пропитанных ацетатом свинца (CH₃COO)₄Pb для выявления газообразного H₂S, более чувствителен, чем описанный выше.

Питательный бульон разливают в пробирки по 8-10 мл, инокулируют суточной бульонной культурой, испытуемой на образование H₂S. Вместо жидкой питательной среды могут быть использованы плотные среды. В пробирки с засеянными средами опускают полоски индикаторной бумаги так, чтобы свободный конец ее был на 1,5-2 см выше уровня питательной среды.

Наружный конец полосы отгибают на 1-1,5 см через край пробирки и плотно прижимают к ней пробкой. Посевы инкубируют в термостате при 36(±1)°С в течение 18-24 ч (для некоторых микроорганизмов требуется более длительная инкубация).

- Читать далее "Тест с лакмусовым молоком для идентификации бактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 21.2.2020