Тест на сахаролитическую активность в идентификации микроорганизмов

Тест на сахаролитическую активность применяется в комплексе реакций, используемых для дифференциальной диагностики и идентификации подавляющего большинства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, при условии, что для каждого вида возбудителя будет подобран набор углеводов, соответствующий его метаболическим свойствам.

Тест основан на способности исследуемого микроорганизма утилизировать углевод, введенный в питательную среду, с образованием кислоты или кислоты и газа, определяемых по изменению цвета индикатора среды и образованию пузырьков.

Техника постановки теста. Испытуемый микроорганизм засевают в жидкие или полужидкие агаризованные (0,2-0,5% агара) питательные среды Гисса, получившие издавна название «пестрый ряд». В состав сред Гисса входят пептон, хлорид натрия, предназначенный для утилизации углевод и индикатор.

Для культивирования притязательных к питанию микроорганизмов к средам Гисса добавляют сыворотку крови животных, дрожжевой экстракт, экстракт кормовых дрожжей или другие требующиеся культивируемым микроорганизмам добавки, но не содержащие других углеводов. Каждую пробирку заполняют 3-5 мл жидкой среды с поплавками (трубками Дюрхема) для улавливания газа.

Среды засевают одной бактериальной петлей (диаметром 2-4 мм) 18-часовой агаровой культуры или 0,5-1 млрд, взвесью бульонной культуры в объеме 0,1 мл. Посевы помещают в термостат при оптимальной для культивируемого микроорганизма температуре. Параллельно с опытными пробирками в термостат помещают 2 контрольные пробирки с посевами эталонных положительных и отрицательных контрольных штаммов и 1 пробирку с незасеянной средой Гисса.

Учет результатов. Просмотр посевов начинают через 24-48 ч. Если культуры быстрорастущие, в течение этого времени могут быть получены и учтены результаты теста. Для медленно растущих микроорганизмов срок инкубации увеличивают до Юсут. Положительный результат реакции проявляется изменением цвета среды соответственно введенному в нее индикатору.

При изготовлении сред Гисса обычно пользуются индикатором Андреде, придающим среде, в зависимости от интенсивности реакции, розовый или малиновый цвет. В пробирках с отрицательным результатом цвет среды не меняется — остается бесцветным или бледно-розовым (отсюда происхождение названия «пестрый ряд»).

Коммерческие среды готовят с индикатором ВР (смесь водно-голубого и розоловой кислоты). При положительном результате реакции (образование кислоты в результате расщепления углевода) бесцветная среда приобретает отчетливо синий цвет.

Газообразование в жидких средах определяют по скоплению пузырьков газа на дне трубок Дюрхема: в агаризованных полужидких средах при слабом газообразовании газовые пузырьки образуются в толще питательной среды, при бурном газообразовании могут наблюдаться случаи разрыва столбика среды.

Углеводы для дифференциальной диагностики и идентификации различных микроорганизмов

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 22.05.2019

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.