При изучении фармакокинетики опиатных лигандов ключевую роль играет выбор метода анализа концентраций данных соединений. Основные требования, предъявляемые к методу, - высокая чувствительность и специфичность. К сожалению, обычно применяемый при фармакокинетических исследованиях радиоиммунологический метод анализа (Spector, 1971; Catlin, 1977) не специфичен к "физиологически активному" морфину, поскольку измеряет также концентрации некоторых метаболитов, в частности морфин-3-глюкуронида, не взаимодействуюпгих с рецепторами. В то же время получение сывороток, не чувствительных к основному метаболиту морфина - морфин-3-глюкурониду, представляется достаточно сложной задачей (Berkowitz et al., 1974).

Для изучения фармакокинетики опиатных лигандов авторами (Зайцев с соавт., 1986; Сергеева с соавт., 1986) предложен радиорецепторный метод анализа на основе препаратов лиофилизованных мембран (Зайцев с соавт., 1983; Сергеева с соавт., 1986). Преимущество этого метода заключается в том, что с помощью него измеряются только те формы лиганда, которые обладают "рецепторной активностью". К морфин-3-глюкорониду данный метод, например, не чувствителен.

При этом если в системе находится несколько опиатных лигандов, то метод дает их эффективную суммарную концентрацию, выражаемую в эквивалентах (единицах) концентрации соединения, по которому производится калибровка (Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985).

При постановке конкретных методик в полной мере были использованы результаты проведенного теоретического рассмотрения радиорецепторного метода. В процессе постановки радиорецепторного метода анализа были получены калибровочные кривые с использованием сыворотки крови и плазмы. Сравнение полученных кривых с калибровочной кривой в буфере показывает, что и плазма и сыворотка обладают ингибирующим эффектом на связывание опиатов, однако у плазмы он выражен слабее.

В этой связи для дальнейшего анализа нами была использована плазма крови. С целью выявления влияния возможного стресса в условиях проведения фармакокинетических измерений на изменение опиатной активности контрольным животным вводили физиологический раствор и производили отбор проб через те же самые временные интервалы, что и при снятии фармакокинетических кривых. Проведенное исследование не позволило установить какие-либо изменения опиатной активности. Чтобы исключить влияние на определение экзогенно добавленных соединений постоянного уровня эндогенных опиатных лигандов (Clementjones et al., 1980; Boarder et al., 1982), построение калибровочных кривых производили по плазме крови, взятой у животного непосредственно перед введением опиатного лиганда.

При исследовании фармакокинетики морфина опиатную активность определяли с использованием калибровочной кривой вытеснения низких концентраций 3Н-налоксона морфином. Параллельно пробы проверялись на изменение концентраций эндогенных опиоидных пептидов, определяемых по вытеснению 0,3-0,4 нМ 3H-D-Ala2, D-Leu5-энкефалина (связывание таких низких концентраций D-Ala2, D-Leu5-энкефалина характеризует комплексообразование лиганда в первую очередь с «5-рецепторами, к которым большинство эндогенных опиоидных пептидов имеет высокое сродство). Введение морфина не приводило к существенному изменению активности проб крови по отношению к процессу связывания 3H-D-Ala2, D-Leu5-энкефалина с рецепторами.

Этот факт указывает на малую вероятность выбора значимых концентраций эндогенных опиоидных пептидов при введении морфина, либо, если выброс и происходит, то речь идет об эндогенных лигандах, не обладающих сродством к рецепторам.

Это дает основания с большой степенью уверенности утверждать, что наблюдаемая кривая отражает фармакокинетику именно морфина в организме собаки.

- Читать далее "Фармакокинетика опиоидных пептидов. Метаболизм опиатов в организме"