Советуем для ознакомления:

Инфекционные болезни:

Популярные разделы сайта:

Методы оценки реакции Т-лимфоцитов на ВИЧ-инфекцию

Для определения реакций CD4+- и CD8+-T-клеток на ВИЧ можно использовать различные методы. С помощью метода тетрамеров можно измерять количество ВИЧ-специфических CD4+- и CD8+-T-клеток методом проточной цитометрии с использованием реагентов на специфические аллельные варианты HLA.

Анализ методом ELISPOT и измерение внутриклеточных цитокинов с использованием проточной цитометрии применяется после короткой стимуляции in vitro пептидами из белков ВИЧ, при этом продукция цитокинов (например, IL-2 и IFN-y) измеряется с помощью специфических антител.

Другая методика, связанная с использованием карбоксил-флуоресцин-диацетат сукцинимидила (CFSE), позволяет методом проточной цитометрии оценить уровень пролиферативной активности клеток. Он позволяет получить такую же информацию, как и с помощью методов измерения пролиферации лимфоцитов, которые определяют деление клетки по встраиванию радиоактивного предшественника в ДНК клетки ([3Н]тимидина).

Отражают ли результаты, полученные при стимуляции in vitro, ситуацию in vivo, неизвестно. Цитотоксическая активность может быть измерена по уменьшению количества клеток, по высвобождению радиоактивных маркеров (51Cr) из гибнущих клеток и/или по экспрессии клеточных маркеров цитотоксичности.

Обычное измерение функций ЦТЛ заключается в определении внутриклеточного перфорина или экспрессии CD 107 белка, связанного с дегрануляцией (т.е. высвобождением цитотоксических пептидов). Важно понять, насколько измеряемая противовирусная активность ЦТЛ влияет на аутологичный вирус и инфицированные первичные CD4+-Т-клетки.

Оценка реакции Т-клеток на ВИЧ-инфекцию
Методы иммуноферментного спот-анализа (ELISPOT) позволяют определять секрецию цитокинов клетками, выращиваемыми в лунках с донышком из пористого материала с использованием антител, меченных ферментом, и колориметрических субстратов.
Искомые клетки подсчитываются под световым микроскопом при низком увеличении или с помощью автоматического счетчика.
Проточная цитометрия для измерения цитокинов (CFC) основана на внутриклеточном окрашивании в присутствии ингибиторов секреции (например, брефелдина А) для определения продукции цитокинов с помощью флуресцентно меченых антител и мультипараметрической проточной цитометрии. CD 107 представляет собой интегральный белок цитотоксических гранул, который временно оказывается на поверхности клетки в процессе дегрануляции ЦТЛ.
Он может быть окрашен с помощью проточной цитометрии и, таким образом, это позволяет идентифицировать дегранулирующие клетки, обладающие цитотоксической активностью. CD107 также можно окрашивать в сочетании с внутриклеточными цитокинами и/или мультимерами МНС-пептидов. Мультимеры МНС-пептидов представляют собой тетрамеры, пентамеры и димеры молекул МНС, связанные с антигенными пептидами и меченные флуоресцентной меткой.
Они могут использоваться для непосредственного определения Т-клеток с определенной пептидположительной специфичностью МНС с помощью проточной цитометрии (например, ВИЧ-специфических Т-клеток). Методы, связанные с использованием бромодеоксиуридина (BrdU) и карбоксифлуоресцин-сукцинимидилового эфира (CFSE) позволяют определять пролиферацию клеток с помощью проточной цитометрии. Методы могут использоваться для определения пролиферативных реакций Т-клеток на антигены ВИЧ.
BrdU представляет собой тимидиновый аналог, который встраивается в ДНК делящихся клеток и может определяться с помощью флуоресцентно меченых антител. CFSE представляет собой цитофильный краситель, с помощью которого метят клеточные белки. После каждого цикла клеточного деления концентрация CFSE в клетках уменьшается за счет разделения между дочерними клетками. Таким образом, ступенчатое уменьшение CFSE используется для определения деления клеток. Перепечатано из 2755, с разрешения.
По-видимому д-р Levy в этой графе имел в виду способность того или иного метода выявить 0,05% искомых клеток, то есть чувствительность метода (Прим. научного редактора).

- Читать "Классификация CD4 Т-лимфоцитов"

Оглавление темы "Иммунный ответ на ВИЧ-инфекцию":
  1. Комплементсвязывающие антитела к ВИЧ
  2. Аутоиммунные реакции и болезни при ВИЧ
  3. Пролиферация В-клеток при ВИЧ
  4. Молекулярная мимикрия при ВИЧ
  5. Антиидиопатические антитела при ВИЧ
  6. Резюме по гуморальному иммунитету у больных ВИЧ
  7. Реакция Т-лимфоцитов на ВИЧ-инфекцию
  8. Методы оценки реакции Т-лимфоцитов на ВИЧ-инфекцию
  9. Классификация CD4 Т-лимфоцитов
  10. Реакции CD4 Т-лимфоцитов

Популярное среди пользователей:

Если остались вопросы - смело задавайте: