Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Остаточный азот. Определение остаточного азота

Остаточным азотом называется азот, имеющийся в составных частях кровигосвобожденной от белка. Это, например, азот аммиака, аминокислот, мочевины, мочевой кислоты, креатина-креатинина. Этот небелковый азот крови находится в фильтрате, в котором белки крови осаждены.

Необходимые реактивы: 1) 10% раствор вольфрамовокислого натрия; 2) 2/3 н. раствор серной кислоты; 3) 1% раствор серной кислоты; 4) пергидрол; 5) стандартный раствор аммиака. 235,7 мг химически чистого высушенного при 100° сернокислого аммония растворяют в 1 л дистиллированной воды, 1 мл этого раствора содержит 0,05 мг азота; 6) реактив Несслера: йодистой ртути 10 г + 5 г йодистого калия + 20 г едкого калия + 200 мл дистиллированной воды; 5 г йодистого калия растворяют в 30 мл дистиллированной воды, переливают в чистую фарфоровую ступку, туда всыпают 10 г йодистой ртути, тщательно растирают, оставляют на некоторое время до максимального растворения; 20 г едкого калия растворяют в 60 мл дистиллированной воды и, когда этот раствор охладится, его смешивают с первым раствором, доливают дистиллированной водой до объема 200 мл и оставляют на 2—3 дня.

Когда выпадет осадок избытка солей ртути, раствор фильтруют через стеклянную вату и сохраняют в темной бутылке с притертой пробкой.

остаточный азот

Методика определения. После укола иглой Франка в палец берут микропипеткой 0,2 мл крови и выдувают ее в центрифужную пробирку с меткой на 10 мл, имеющую 5,4 мл дистиллированной воды; этой же водой несколько раз промывают микропипетку от остатков крови, приливают 0,2 мл реактива № 1, хорошо смешивают и, все время помешивая, прибавляют по каплям 0,2 мл реактива № 2.

Пробирку прикрывают пробкой, смесь энергично взбалтывают и оставляют на 1—2 часа для осаждения белков, после чего раствор фильтруют в чистую сухую пробирку через маленькую воронку. Получается прозрачный фильтрат. В чистую сухую пробирку пипеткой вливают 3 мл полученного фильтрата (что равняется 0,1 мл крови), прибавляют 1 мл реактива № 3 и помещают на песочную баню для нагревания до появления густых белых паров. После этого пробирку снимают, охлаждают, прибавляют 1—2 капли реактива № 4 и опять нагревают на песочной бане до образования в пробирке бесцветной и прозрачной жидкости.

Прозрачную жидкость в пробирке охлаждают и прибавляют к ней 6 мл дистиллированной воды. Одновременно приготовляют стандартный раствор. В такую же пробирку с меткой на 10 мл вливают 1 мл реактива № 5 (стандартный раствор), 1 мл реактива № 3, 6 мл дистиллированной воды и хорошо смешивают. В обе пробирки наливают по 3 мл реактива № 6, долива ют дистиллированной воды до метки 10 мл и колориметрйруют

Расчет. При колориметрировании для реакции употреблено 0,1 мл крови. Стандарт (0,05 мг остаточного азота) установлен на 20. Исследуемый раствор при одинаковой окраске со стандартом установлен, допустим, на 27. Эти данные получены при количестве 0,1 мл испытуемой крови. Количество остаточного азота в 100 мл данной крови будет во столько раз больше, во сколько больше 0,1.

Ввиду того, что некоторое количество остаточного азота может быть в реактивах, а также и в дистиллированной воде, то необходимо определить остаточный азот в употребляемых при реакции реактивах и воде, полученный результат вычесть из результата исследования крови.
Концентрация остаточного азота в норме в крови составляет 20—40 мг%. При болезни почек количество RN повышается и может достигать 200 мг%.

- Читать далее "Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю"

Оглавление темы "Биохимия крови":
1. Определение мочевой кислоты. Метод Бенедикта
2. Техника определения мочевой кислоты. Диагностика мочевины крови
3. Техника определения мочевины крови. Последовательность выявления мочевины
4. Остаточный азот. Определение остаточного азота
5. Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю
6. Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга
7. Определение билирубина в крови по Бокальчуку. Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени
8. Упрощенная реакция Таката-Ара. Тимоловая проба
9. Определение холестерина. Метод Аутенрита
10. Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия