Лабораторная диагностика

Способ Кьельдаля основан на следующем принципе: азот, содержащийся в безбелковом фильтрате, при сжигании с серной кислотой переводится в аммиак, который затем освобождают концентрированной щелочью и перегоняют в титрованный раствор кислоты.

Реактивы: 1. 20% раствор трихлоруксусной кислоты.
2. Минерализующая смесь по Фолину: к 50 мл 5% раствора сернокислой меди прибавляют 300 мл концентрированной (85%) фосфорной кислоты (удельный вес 1,7) и 100 мл концентрированной, хранившейся без доступа аммиака, серной кислоты.
Минерализующую смесь можно приготовить и другим способом. В цилиндр вливают 300 мл фосфорной кислоты и 100 мл концентрированной серной кислоты, цилиндр плотно прикрывают от поглощения жидкостями аммиака, оставляют на 6—7 дней для осаждения сернокислого кальция, затем сливают прозрачную' жидкость и на каждые 100 мл этой жидкости прибавляют 10 мл 6% раствора сернокислой меди.

3. 33% едкий натрий.
4. Метилрот.
5. 0,01 н. раствор серной либо соляной кислоты.
6. 0,01 н. раствор едкого натра .

Титр растворов необходимо часто проверять, особенно, когда данные контрольного опыта не обычны.
Аппарат для определения состоит из: а) перегонной колбы в 100—200 мл, в пробке которой имеются два отверстия: первое — для перегонной трубки и второе для воронки, через которую приливают едкий натр, б) холодильника и в) приемника с боковой трубкой для соединения с водоструйным насосом (эту трубку можно вставить через второе отверстие, сделанное в пробке. Все части аппарата соединены между собой резиновыми пробками.

Перегонная колба нагревается снизу огнем либо паром.
При нагревании паром воронка для приливания едкого натра вмонтирована в трубку, по которой поступает пар из парообразователя.
Для поглощения аммиака, попадающего из воздуха, в парообразователь вливают серную кислоту.

Определение:
К 4 мл испытуемой крови, сыворотки либо плазмы приливают 8 мл дистиллированной воды и 8 мл трихлоруксусной кислоты, хорошо смешивают и фильтруют.

В перегонную колбу вливают 5 мл фильтрата (1 мл испытуемой крови), 1 мл реактива № 2 и нагревают на слабом пламени до появления белых паров, которые должны остаться в колбе. Колбу устанавливают так, чтобы дно ее еле касалось пламени. Сжигание считается законченным, когда жидкость в колбе становится голубоватой или бесцветной. Колбу оставляют остыть.
Для остывания колбы надо не больше 1,5—2 минут, иначе образуется плохо растворимый осадок.

Затем приливают по стенке воду, промывая ею и воронку, взбалтывая до полного смешивания, подогревая при необходимости. Все части аппарата и приемник соединяют между собой. В приемник вливают 10 мл 0,01 н. раствора серной кислоты (реактив № 5), 1—2 капли метилрот (реактив № 4) и соединяют приемник с водоструйным насосом.

В собранный аппарат начинают пропускать воздух и вливают в перегонную колбу 33% едкого натрия до перехода жидкости из бесцветной в темно-синюю или темно-бурую, что указывает на щелочную реакцию.

Через 10 минут перегонку прекращают, закрывают кран водоструйного насоса, открывают пробку приемника, смывают серную кислоту с конца холодильника, заменяют другим приемником с таким же количеством 0,01 н. раствора серной кислоты и, перегоняя еще несколько минут, удостоверяются в точности первой перегонки.
Первый приемник с жидкостью красного цвета титруют едким натром до получения не изменяющегося в течение 0,5 минуты канареечно-желтого цвета.

Расчет: 1 мл 0,01 н. серной кислоты или едкого натрия соответствует 0,14 мг азота.
Разность между количеством серной кислоты, влитой в приемник, и количеством израсходованного едкого натрия при титровании, помноженная на 0,14 мг, соответствует количеству остаточного азота в исследуемом 1 мл крови. Чтоб выразить количество азота в миллиграмм-процентах, надо полученное число помножить на 100.

Примечание. Одновременно с исследованием крови надо поставить контрольный опыт с теми же реактивами, но вместо крови взять такое же количество воды (слепой опыт).

- Читать далее "Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга"