Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю

Способ Кьельдаля основан на следующем принципе: азот, содержащийся в безбелковом фильтрате, при сжигании с серной кислотой переводится в аммиак, который затем освобождают концентрированной щелочью и перегоняют в титрованный раствор кислоты.

Реактивы: 1. 20% раствор трихлоруксусной кислоты.
2. Минерализующая смесь по Фолину: к 50 мл 5% раствора сернокислой меди прибавляют 300 мл концентрированной (85%) фосфорной кислоты (удельный вес 1,7) и 100 мл концентрированной, хранившейся без доступа аммиака, серной кислоты.
Минерализующую смесь можно приготовить и другим способом. В цилиндр вливают 300 мл фосфорной кислоты и 100 мл концентрированной серной кислоты, цилиндр плотно прикрывают от поглощения жидкостями аммиака, оставляют на 6—7 дней для осаждения сернокислого кальция, затем сливают прозрачную' жидкость и на каждые 100 мл этой жидкости прибавляют 10 мл 6% раствора сернокислой меди.

3. 33% едкий натрий.
4. Метилрот.
5. 0,01 н. раствор серной либо соляной кислоты.
6. 0,01 н. раствор едкого натра .

способ кьельдаля

Титр растворов необходимо часто проверять, особенно, когда данные контрольного опыта не обычны.
Аппарат для определения состоит из: а) перегонной колбы в 100—200 мл, в пробке которой имеются два отверстия: первое — для перегонной трубки и второе для воронки, через которую приливают едкий натр, б) холодильника и в) приемника с боковой трубкой для соединения с водоструйным насосом (эту трубку можно вставить через второе отверстие, сделанное в пробке. Все части аппарата соединены между собой резиновыми пробками.

Перегонная колба нагревается снизу огнем либо паром.
При нагревании паром воронка для приливания едкого натра вмонтирована в трубку, по которой поступает пар из парообразователя.
Для поглощения аммиака, попадающего из воздуха, в парообразователь вливают серную кислоту.

Определение:
К 4 мл испытуемой крови, сыворотки либо плазмы приливают 8 мл дистиллированной воды и 8 мл трихлоруксусной кислоты, хорошо смешивают и фильтруют.

В перегонную колбу вливают 5 мл фильтрата (1 мл испытуемой крови), 1 мл реактива № 2 и нагревают на слабом пламени до появления белых паров, которые должны остаться в колбе. Колбу устанавливают так, чтобы дно ее еле касалось пламени. Сжигание считается законченным, когда жидкость в колбе становится голубоватой или бесцветной. Колбу оставляют остыть.
Для остывания колбы надо не больше 1,5—2 минут, иначе образуется плохо растворимый осадок.

Затем приливают по стенке воду, промывая ею и воронку, взбалтывая до полного смешивания, подогревая при необходимости. Все части аппарата и приемник соединяют между собой. В приемник вливают 10 мл 0,01 н. раствора серной кислоты (реактив № 5), 1—2 капли метилрот (реактив № 4) и соединяют приемник с водоструйным насосом.

В собранный аппарат начинают пропускать воздух и вливают в перегонную колбу 33% едкого натрия до перехода жидкости из бесцветной в темно-синюю или темно-бурую, что указывает на щелочную реакцию.

Через 10 минут перегонку прекращают, закрывают кран водоструйного насоса, открывают пробку приемника, смывают серную кислоту с конца холодильника, заменяют другим приемником с таким же количеством 0,01 н. раствора серной кислоты и, перегоняя еще несколько минут, удостоверяются в точности первой перегонки.
Первый приемник с жидкостью красного цвета титруют едким натром до получения не изменяющегося в течение 0,5 минуты канареечно-желтого цвета.

Расчет: 1 мл 0,01 н. серной кислоты или едкого натрия соответствует 0,14 мг азота.
Разность между количеством серной кислоты, влитой в приемник, и количеством израсходованного едкого натрия при титровании, помноженная на 0,14 мг, соответствует количеству остаточного азота в исследуемом 1 мл крови. Чтоб выразить количество азота в миллиграмм-процентах, надо полученное число помножить на 100.

Примечание. Одновременно с исследованием крови надо поставить контрольный опыт с теми же реактивами, но вместо крови взять такое же количество воды (слепой опыт).

- Читать далее "Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга"

Оглавление темы "Биохимия крови":
1. Определение мочевой кислоты. Метод Бенедикта
2. Техника определения мочевой кислоты. Диагностика мочевины крови
3. Техника определения мочевины крови. Последовательность выявления мочевины
4. Остаточный азот. Определение остаточного азота
5. Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю
6. Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга
7. Определение билирубина в крови по Бокальчуку. Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени
8. Упрощенная реакция Таката-Ара. Тимоловая проба
9. Определение холестерина. Метод Аутенрита
10. Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия