Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Определение холестерина. Метод Аутенрита

Метод Аутенрита (Autenrieth) основан на получении цветной реакции холестерина с ангидридом уксусной кислоты и с серной кислотой.
Необходимые реактивы: 1) 25% раствор едкого калия, 2) хлороформ, 3) безводный сернокислый натрий, 4) ангидрид уксусной кислоты, 5) крепкая серная кислота, 6) стандартный раствор холестерина (0,1 г холестерина растворяют в 100 мл хлороформа, 1 мл этого раствора содержит 1 мг холестерина). Этот раствор сохраняется в темной бутылке с притертой пробкой в темном и прохладном месте.

Техника определения. В чистую сухую колбу емкостью в 30 мл вливают 1 мл исследуемой сыворотки, 10 мл 25% раствора едкого калия (реактив 1) смешивают и ставят на 2—3 часа в кипящую водяную баню. Остывшую жидкость из колбы переливают в делительную воронку объемом в 25—30 мл, колбу смывают 5 мл хлороформа, которые также переливают в воронку, хорошо встряхивают и после образования слоев сливают слой хлороформа в чистую колбу.

В колбу из-под жидкости снова наливают 5 мл хлороформа, взбалтывают и выливают опять к воронку, вновь тщательно встряхивают, снова отделяют хлороформ и приливают его в колбу к первой порции хлороформа.

определение холестерина

Такую манипуляцию с 5 мл хлороформа проделывают еще раз. Затем в колбу с мутноватым хлороформным экстрактом прибавляют для просветления 5 г безводного сернокислого натрия (реактив 3), взбалтывают и фильтруют в сухую колбу емкостью в 25 мл. В опорожненную колбу вливают 5 мл хлороформа, хорошо ополаскивают и этот хлороформ прибавляют, также фильтруя, к хлороформному экстракту и добавляют еще хлороформ до метки 25 мл.

Вливают 10 мл полученной хлороформной вытяжки в сухую пробирку, добавляют 4 мл уксусного ангидрида (реактив 4) и 0,2 мл серной кислоты (реактив 5), все хорошо смешивают и затыкают пробирку пробкой — это испытуемый раствор. В мерную колбу емкостью в 25 мл вливают 2 мл стандартного раствора (реактив 6), доливают до метки 25 мл хлороформа и хорошо взбалтывают. 10 мл этого раствора вливают в чистую сухую пробирку, куда добавляют 4 мл уксусного ангидрида, 0,2 мл серной кислоты, все это смешивают и также затыкают пробирку пробкой. Это пробирка со стандартным раствором. Пробирки с испытуемым и стандартным растворами ставят на 15—20 минут в термостат при температуре 32—35°, после чего колориметрируют в колориметре типа Дюбоска.
Расчет. Устанавливают в колориметре толщину слоев испытуемого и стандартного растворов одинаковой окраски.

Значение в этой формуле цифры 200 видно из следующего.
Предположим, что при колориметрировании толщина слоев стандартного и испытуемого растворов была одинаковой при одинаковой окраске жидкостей. Известно, что для приготовления 25 мл стандартного раствора употреблено 2 мг холестерина. Значит, в данном случае при одинаковой окраске и толщине слоя обоих растворов в 25 мл испытуемого раствора, содержащего 1 мл сыворотки, также имеется 2 мг холестерина. В 100 мл сыворотки будет 2 100=200 мг холестерина.

- Читать далее "Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия"

Оглавление темы "Биохимия крови":
1. Определение мочевой кислоты. Метод Бенедикта
2. Техника определения мочевой кислоты. Диагностика мочевины крови
3. Техника определения мочевины крови. Последовательность выявления мочевины
4. Остаточный азот. Определение остаточного азота
5. Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю
6. Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга
7. Определение билирубина в крови по Бокальчуку. Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени
8. Упрощенная реакция Таката-Ара. Тимоловая проба
9. Определение холестерина. Метод Аутенрита
10. Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия