Лабораторная диагностика

Метод Аутенрита (Autenrieth) основан на получении цветной реакции холестерина с ангидридом уксусной кислоты и с серной кислотой.
Необходимые реактивы: 1) 25% раствор едкого калия, 2) хлороформ, 3) безводный сернокислый натрий, 4) ангидрид уксусной кислоты, 5) крепкая серная кислота, 6) стандартный раствор холестерина (0,1 г холестерина растворяют в 100 мл хлороформа, 1 мл этого раствора содержит 1 мг холестерина). Этот раствор сохраняется в темной бутылке с притертой пробкой в темном и прохладном месте.

Техника определения. В чистую сухую колбу емкостью в 30 мл вливают 1 мл исследуемой сыворотки, 10 мл 25% раствора едкого калия (реактив 1) смешивают и ставят на 2—3 часа в кипящую водяную баню. Остывшую жидкость из колбы переливают в делительную воронку объемом в 25—30 мл, колбу смывают 5 мл хлороформа, которые также переливают в воронку, хорошо встряхивают и после образования слоев сливают слой хлороформа в чистую колбу.

В колбу из-под жидкости снова наливают 5 мл хлороформа, взбалтывают и выливают опять к воронку, вновь тщательно встряхивают, снова отделяют хлороформ и приливают его в колбу к первой порции хлороформа.

Такую манипуляцию с 5 мл хлороформа проделывают еще раз. Затем в колбу с мутноватым хлороформным экстрактом прибавляют для просветления 5 г безводного сернокислого натрия (реактив 3), взбалтывают и фильтруют в сухую колбу емкостью в 25 мл. В опорожненную колбу вливают 5 мл хлороформа, хорошо ополаскивают и этот хлороформ прибавляют, также фильтруя, к хлороформному экстракту и добавляют еще хлороформ до метки 25 мл.

Вливают 10 мл полученной хлороформной вытяжки в сухую пробирку, добавляют 4 мл уксусного ангидрида (реактив 4) и 0,2 мл серной кислоты (реактив 5), все хорошо смешивают и затыкают пробирку пробкой — это испытуемый раствор. В мерную колбу емкостью в 25 мл вливают 2 мл стандартного раствора (реактив 6), доливают до метки 25 мл хлороформа и хорошо взбалтывают. 10 мл этого раствора вливают в чистую сухую пробирку, куда добавляют 4 мл уксусного ангидрида, 0,2 мл серной кислоты, все это смешивают и также затыкают пробирку пробкой. Это пробирка со стандартным раствором. Пробирки с испытуемым и стандартным растворами ставят на 15—20 минут в термостат при температуре 32—35°, после чего колориметрируют в колориметре типа Дюбоска.
Расчет. Устанавливают в колориметре толщину слоев испытуемого и стандартного растворов одинаковой окраски.

Значение в этой формуле цифры 200 видно из следующего.
Предположим, что при колориметрировании толщина слоев стандартного и испытуемого растворов была одинаковой при одинаковой окраске жидкостей. Известно, что для приготовления 25 мл стандартного раствора употреблено 2 мг холестерина. Значит, в данном случае при одинаковой окраске и толщине слоя обоих растворов в 25 мл испытуемого раствора, содержащего 1 мл сыворотки, также имеется 2 мг холестерина. В 100 мл сыворотки будет 2 100=200 мг холестерина.

- Читать далее "Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия"