Лабораторная диагностика

Необходимые реактивы: холестерин, хлороформ, эфир, уксусный антидрид, крепкая серная кислота.
В центрифужную пробирку вливают 8 мл этилового спирта (95%), 2 мл эфира и в эту смесь добавляют 0,2 мл исследуемой крови. Пробирку закрывают пробкой, энергично взбалтывают 1—2 минуты и кладут горизонтально на стол на 30 минут, изредка встряхивая пробирку. Затем пробирку центрифугируют, жидкость сливают в чашечку и выпаривают досуха на водяной бане. Осадок экстрагируют, смывая его вначале 2 мл, а затем 3 мл хлороформа в пробирку, добавляют 2 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл серной кислоты, хорошо перемешивают и ставят в темное место на 10 минут.

После этого колориметрируют со стандартным раствором холестерина или фотометрируют посредством фотоэлектроколориметра. Приготовление стандартного раствора холестерина: сначала делают основной раствор — 0,1 г холестерина растворяют в 100 мл хлороформа; затем 8 мл этого раствора разводят до 100 мл хлороформом — получают стандартный раствор холестерина, содержащий 0,08 мл холестерина в 1 мл.

Определение калия

Принцип метода основан на осаждении калия сыворотки крови избытком кобальтовой соли. Получается сложное кобальтовое соединение калия, который оттитровывается раствором марганцовокислого калия.

Необходимые реактивы:
1) реактив состоит из двух растворов: а) азотнокислого кобальта 25 г, ледяной уксусной кислоты 12,5 мл + дистиллированной воды 50 мл\ б) химически чистого азотистокислого натрия 120 г + дистиллированной воды 180 мл; растворяют при легком нагревании. К раствору «а» приливают 210 мл раствора «б» и через полученную смесь пропускают струю воздуха до удаления бурых паров окислов азота Реактив становится светлым и прозрачным Сохраняют его на льду, он годен в продолжение месяца. Перед употреблением реактив следует фильтровать. Если он потемнеет, то нужно продуть через него воздух;
2) серной кислоты химически чистой, крепкой 20 мл + + дистиллированной воды 80 мл\
3) 0,01 н. раствор щавелевокислого натрия;
4) 0,01 н. раствор марганцовокислого калия.

Титр марганцовокислого калия устанавливают по раствору щавелевокислого натрия. Оба 0,01 н. раствора готовят из 0,1 н. раствора.
Методика определения. В сухую центрифужную пробирку вливают 1 мл испытуемой сыворотки, прибавляют медленно, по каплям 2 мл профильтрованного реактива № 1 и оставляют при частом взбалтывании на 45 минут в прохладном месте, после чего добавляют 3 мл дистиллированной воды и центрифугируют до просветления жидкости.

Жидкость отсасывают, а к осадку приливают вновь 3 мл дистиллированной воды, снова центрифугируют, отсасывают жидкость, прибавляют к осадку 3 мл дистиллированной воды, центрифугируют. Так проделывают 3—4 раза до тех пор, пока над осадком жидкость станет бесцветной. После того как отсосали жидкость над осадком в последний раз, к нему прибавляют 2—5 мл реактива № 4, 1 мл реактива № 2, все смешивают и ставят в кипящую баню на 1,5 минуты. Смесь должна быть окрашенной Если она в горячем виде бесцветна, то следует добавить к ней еще 2—3 мл реактива № 4 и снова поставить на 1,5 минуты в кипящую баню. К горячей окрашенной смеси прибавляют 3 мл и больше реактива № 3, отчего смесь должна обесцветиться. Титрованием из бюретки этой обесцвеченной жидкости раствором марганцовокислого калия (реактив № 4) до появления в ней не исчезающей в продолжение одной минуты розовой окраски узнают избыток щавелевокислого натрия.

Вычисление. 1 мл 0,01 н раствора марганцовокислого калия окисляет двойную соль калия в количестве, равном 0,071 мг калия. Складывают все количество израсходованного для реакции марганцовокислого калия, включая и количество его, употребленное для титрования (2—5 мл + 2 мл прибавленные + 4- количество, потраченное при титровании), из этой суммы отнимают число миллилитров прибавленного раствора щавелевокислого натрия, разность умножают на 0,071.

Полученное число указывает количество калия в 1 мл сыворотки. В 100 мл сыворотки калия будет в 100 раз больше.
Пример. К осадку прибавлено точно 5 мл раствора марганцовокислого калия, затем при титровании потрачено еще 1 мл. После нагревания прибавлено 3 мл щавелевокислого натрия Следовательно, содержание калия в 1 мл сыворотки (5+1— 3) -0,071=0,213, а в 100 мл сыворотки будет 0,213-100= =21,3 мг%.

В сыворотке здорового человека в норме содержится 18— 22,5 мг% калия. При закупорке желчных путей наблюдается пониженное количество калия.

- Вернуться в оглавление раздела "лабораторная диагностика"