Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия

Необходимые реактивы: холестерин, хлороформ, эфир, уксусный антидрид, крепкая серная кислота.
В центрифужную пробирку вливают 8 мл этилового спирта (95%), 2 мл эфира и в эту смесь добавляют 0,2 мл исследуемой крови. Пробирку закрывают пробкой, энергично взбалтывают 1—2 минуты и кладут горизонтально на стол на 30 минут, изредка встряхивая пробирку. Затем пробирку центрифугируют, жидкость сливают в чашечку и выпаривают досуха на водяной бане. Осадок экстрагируют, смывая его вначале 2 мл, а затем 3 мл хлороформа в пробирку, добавляют 2 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл серной кислоты, хорошо перемешивают и ставят в темное место на 10 минут.

После этого колориметрируют со стандартным раствором холестерина или фотометрируют посредством фотоэлектроколориметра. Приготовление стандартного раствора холестерина: сначала делают основной раствор — 0,1 г холестерина растворяют в 100 мл хлороформа; затем 8 мл этого раствора разводят до 100 мл хлороформом — получают стандартный раствор холестерина, содержащий 0,08 мл холестерина в 1 мл.

Определение калия

Принцип метода основан на осаждении калия сыворотки крови избытком кобальтовой соли. Получается сложное кобальтовое соединение калия, который оттитровывается раствором марганцовокислого калия.

Необходимые реактивы:
1) реактив состоит из двух растворов: а) азотнокислого кобальта 25 г, ледяной уксусной кислоты 12,5 мл + дистиллированной воды 50 мл\ б) химически чистого азотистокислого натрия 120 г + дистиллированной воды 180 мл; растворяют при легком нагревании. К раствору «а» приливают 210 мл раствора «б» и через полученную смесь пропускают струю воздуха до удаления бурых паров окислов азота Реактив становится светлым и прозрачным Сохраняют его на льду, он годен в продолжение месяца. Перед употреблением реактив следует фильтровать. Если он потемнеет, то нужно продуть через него воздух;
2) серной кислоты химически чистой, крепкой 20 мл + + дистиллированной воды 80 мл\
3) 0,01 н. раствор щавелевокислого натрия;
4) 0,01 н. раствор марганцовокислого калия.

определение холестерина

Титр марганцовокислого калия устанавливают по раствору щавелевокислого натрия. Оба 0,01 н. раствора готовят из 0,1 н. раствора.
Методика определения. В сухую центрифужную пробирку вливают 1 мл испытуемой сыворотки, прибавляют медленно, по каплям 2 мл профильтрованного реактива № 1 и оставляют при частом взбалтывании на 45 минут в прохладном месте, после чего добавляют 3 мл дистиллированной воды и центрифугируют до просветления жидкости.

Жидкость отсасывают, а к осадку приливают вновь 3 мл дистиллированной воды, снова центрифугируют, отсасывают жидкость, прибавляют к осадку 3 мл дистиллированной воды, центрифугируют. Так проделывают 3—4 раза до тех пор, пока над осадком жидкость станет бесцветной. После того как отсосали жидкость над осадком в последний раз, к нему прибавляют 2—5 мл реактива № 4, 1 мл реактива № 2, все смешивают и ставят в кипящую баню на 1,5 минуты. Смесь должна быть окрашенной Если она в горячем виде бесцветна, то следует добавить к ней еще 2—3 мл реактива № 4 и снова поставить на 1,5 минуты в кипящую баню. К горячей окрашенной смеси прибавляют 3 мл и больше реактива № 3, отчего смесь должна обесцветиться. Титрованием из бюретки этой обесцвеченной жидкости раствором марганцовокислого калия (реактив № 4) до появления в ней не исчезающей в продолжение одной минуты розовой окраски узнают избыток щавелевокислого натрия.

Вычисление. 1 мл 0,01 н раствора марганцовокислого калия окисляет двойную соль калия в количестве, равном 0,071 мг калия. Складывают все количество израсходованного для реакции марганцовокислого калия, включая и количество его, употребленное для титрования (2—5 мл + 2 мл прибавленные + 4- количество, потраченное при титровании), из этой суммы отнимают число миллилитров прибавленного раствора щавелевокислого натрия, разность умножают на 0,071.

Полученное число указывает количество калия в 1 мл сыворотки. В 100 мл сыворотки калия будет в 100 раз больше.
Пример. К осадку прибавлено точно 5 мл раствора марганцовокислого калия, затем при титровании потрачено еще 1 мл. После нагревания прибавлено 3 мл щавелевокислого натрия Следовательно, содержание калия в 1 мл сыворотки (5+1— 3) -0,071=0,213, а в 100 мл сыворотки будет 0,213-100= =21,3 мг%.

В сыворотке здорового человека в норме содержится 18— 22,5 мг% калия. При закупорке желчных путей наблюдается пониженное количество калия.

- Вернуться в оглавление раздела "лабораторная диагностика"

Оглавление темы "Биохимия крови":
1. Определение мочевой кислоты. Метод Бенедикта
2. Техника определения мочевой кислоты. Диагностика мочевины крови
3. Техника определения мочевины крови. Последовательность выявления мочевины
4. Остаточный азот. Определение остаточного азота
5. Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю
6. Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга
7. Определение билирубина в крови по Бокальчуку. Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени
8. Упрощенная реакция Таката-Ара. Тимоловая проба
9. Определение холестерина. Метод Аутенрита
10. Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия