Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга

Принцип реакции основан на свойстве спирта осаждать белки сыворотки крови, извлекая в то же время из нее желчные пигменты.
Билирубин человеческой сыворотки имеется в двух видах. Незначительное количество билирубина содержится в нормальной сыворотке, но от прибавления к ней диазореактива билирубин не окрашивается.

Один вид билирубина при некоторых заболеваниях, например в случае застойной желтухи, при прибавлении к сыворотке диазореактива получает розово-красное окрашивание. Иногда это окрашивание происходит сразу (в течение 30 секунд) и интенсивно — это прямая быстрая реакция; окрашивание может появиться спустя 3—4 минуты, тогда это прямая замедленная реакция.

При другом виде билирубина получается красное окрашивание от прибавления диазореактива только тогда, когда в сыворотке осаждают белок спиртом. Получается так называемая непрямая реакция.

Прямая реакция. В пробирку вливают 1 мл сыворотки, 2 мл дистиллированной воды и 0,25 мл свежеприготовленного диазореактива. Содержимое пробирки хорошо смешивают. При положительном результате получается розово-красное окрашивание. От добавления 1—2 капель крепкой соляной кислоты указанная окраска переходит в сине-фиолетовую. Отсутствие в пробирке окраски жидкости указывает на отрицательную прямую реакцию.

Непрямая реакция. Смешивают 1 мл сыворотки с 2 мл 96° спирта и центрифугируют. К полученной прозрачной жидкости добавляют 0,25 мл диазореактива. При положительной непрямой реакции в пробирке получается интенсивное красное окрашивание.
Обе эти реакции можно произвести с меньшим количеством сыворотки при соблюдении указанных соотношений.
Количество билирубина определяют при сравнении со стандартным раствором в колориметре.

билирубин крови

Для реакции необходимы следующие реактивы:
1. Спирт ректификат 96°.
2. Диазореактив Эрлиха, состоящий из следующих двух растворов, которые смешивают к моменту постановки реакции.

Раствор I: сульфаниловой кислоты — C6H4(NH2)S03H 2H20 — 1 г, соляной кислоты (удельного веса 1,12) — 15 мл, дистиллированной воды — 1 л. Сульфаниловую кислоту смешивают в литровой колбе с соляной кислотой и небольшим количеством дистиллированной воды, а затем нагревают до растворения, после чего прибавляют остальную воду.
Раствор II: 0,5% азотнокислого натрия (NaN02).
Диазореактив Эрлиха состоит из 8 мл раствора 1 и 0,25 мл раствора II.
Раствор II не должен содержать избытка азотистой кислоты (отсутствие посинения йодо-калиево-крахмальной бумажки).

3. Стандартный раствор 2,161 г сернокислого кобальта (CoS04) растворяют в 100 мл воды.
Ввиду того, что продажный препарат содержит много воды, его высушивают методом Пинкуссена (Pincussen).

Препарат высушивают нагреванием до слабо-красного каления и по охлаждении приготовляют 2% раствор, по окраске соответствующий раствору билирубина 1:200 000 (0,5 мг%). Раствор устойчив.

Оборудование. Две пипетки Мора в 1 мл для крови и в 2 мл для спирта. Градуированные пипетки: одна в 1 мл и две по 2 мл Пробирки центрифужные. Колориметр.
Постановка реакции. Для реакции необходимо 1—2 мл сыворотки, для чего надо взять 4—5 мл крови.

Кровь, взятую из вены, для свертывания ставят на 3—4 часа Полученную прозрачную сыворотку в количестве 1 мл сливают в центрифужную пробирку, прибавляют 2 мл спирта, жидкости хорошо смешивают и центрифугируют.

1 мл отцентрифугированной прозрачной жидкости вливают в сосуд колориметра, прибавляют 0,25 мл реактива 2 (диазореактив) и 0,5 мл спирта. Получается смесь от розоватого до красного цвета. В пустой клин или стаканчик колориметра наливают стандартный раствор (3) и через 10 минут колориметрируют.

При образовании сине-фиолетового оттенка (от избытка кислотности смеси) к смеси прибавляют одну каплю спиртового раствора аммиака, при этом получается красный цвет. От избытка щелочи получается желтоватый оттенок, в таких случаях к смеси прибавляют одну каплю соляной кислоты в разведении 1 : 20.

- Читать далее "Определение билирубина в крови по Бокальчуку. Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени"

Оглавление темы "Биохимия крови":
1. Определение мочевой кислоты. Метод Бенедикта
2. Техника определения мочевой кислоты. Диагностика мочевины крови
3. Техника определения мочевины крови. Последовательность выявления мочевины
4. Остаточный азот. Определение остаточного азота
5. Способ Кьельдаля. Определение остаточного азота по Кьедалю
6. Определение билирубина крови. Реакция ван ден Берга
7. Определение билирубина в крови по Бокальчуку. Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени
8. Упрощенная реакция Таката-Ара. Тимоловая проба
9. Определение холестерина. Метод Аутенрита
10. Определение холестерина с осаждением белков. Определение калия