Лабораторная диагностика лепры

а) Бактериоскопическое исследование остается базовым лабораторным критерием для диагностики лепры и представляет собой качественно и количественно унифицированную систему, итоговым выражением которой является так называемый бактериоскопический индекс (БИН).

Материалом для бактериоскопии служит соскоб со слизистой оболочки перегородки носа (после предварительной очистки носовых ходов) при помощи зонда с туго намотанным ватным тампоном (на вате должна быть сукровица) и тканевая жидкость, получаемая при соскобе с боков небольшого надреза кожи скальпелем. Длина надреза должна быть в пределах 5-10 мм, глубина — не более 2 мм (примеси крови в материале следует избегать). Скарификаты следует брать с 6 участков: мочек ушей, надбровных дуг, подбородка и нескольких пораженных высыпаниями участков кожи. Материал наносится на чистое обезжиренное предметное стекло в виде круга диаметром 5-7 мм, высушивается и окрашивается по Цилю-Нельсену.

Для подсчета количества М. leprae и вычисления бактериоскопического индекса (БИН) просматривается 100 полей зрения по зигзагообразному визуальному треку (с использованием иммерсионного объектива микроскопа). Количество микобактерий оценивается в плюсах по шестибалльной системе (Ridley D.S., 1964). При этом для данного больного исчисляется БИН каждого мазка и среднеарифметический БИН мазков из всех шести исследованных участков.

При наличии от 1 до 10 микобактерий в одном поле зрения (БИН=3+) и более допускается снижение числа подсчитываемых полей зрения до 25.

Однократное обнаружение одной-двух кислотоустойчивых микобактерий не является достаточным основанием для установления диагноза лепры, так как на коже и слизистых могут присутствовать микобактерии, не являющиеся возбудителем лепры и в то же время морфологически схожие с ним (М. tuberculosis, M.ulcerans и др.). В подобных ситуациях следует произвести повторное взятие и исследование материала, при котором необходимо учитывать некоторые характерные особенности, присущие M.leprae, — тенденцию к группированию и образованию скоплений, а также внутриклеточное их расположение в макрофагах.

В ходе лечения лепры для оценки его эффективности исследование БИН проводится через 3, 6, 12, 18 и 24 мес. лечения.

При оценке эффективности и результатов лечения, помимо БИН, используется также подсчет морфологического индекса (МИ), отражающего соотношение в препарате гомогенных (равномерно окрашенных) и зернистых форм M.leprae. Для этого в поле зрения микроскопа подсчитывается подряд 100-200 микобактерий. Доля (%) в их числе гомогенных форм возбудителя и представляет собой количественное выражение МИ.

Помимо этого может вычисляться так называемый индекс зернистости, количественно характеризующий все три морфологические формы возбудителя (гомогенные, фрагментированные, зернистые).

б) Патоморфологические исследования. Для окончательного установления диагноза лепры, уточнения типа, по которому протекает заболевание, а также для контроля за эффективностью лечения и прогнозирования течения процесса необходимо проведение бактериоскопического и гистологического изучения биоптата кожи с мест ее поражения. Именно результаты этого исследования служат основным критерием излечения больного. Биопсия должна производиться из периферической части подозрительного на лепру элемента под местной анестезией с использованием новокаина или хлорэтила. Участок кожи, где должна проводиться биопсия, предварительно протирают эфиром, спиртом или спиртовым раствором йода.

Биоптат по площади должен быть не менее 0,5 см2 (1,0x0,5 см) и вместе с дермой захватывать подкожную жировую клетчатку (на рану накладывается шов и стерильная повязка). Биоптат фиксируется в 10% растворе формалина (в этом фиксаторе материал может храниться несколько лет). В случае необходимости пересылки биоптата для квалифицированного заключения в централизованную специализированную лабораторию биопсийный материал помещают в плотно закрывающийся надежно фиксированной пробкой флакон (например, из-под пенициллина) с раствором формалина. С целью подтверждения диагноза лепры для изучения гистологических срезов применяются следующие основные виды окраски:

1) гематоксилином и эозином — общая оценка гистологической картины;
2) карболовым фуксином (по Цилю-Нильсену) — обнаружение микобактерий лепры;
3) Суданом III или шарлахом — определение липидов.

в) Иммунологическое состояние больного по отношению к M.leprae определяется лепроминовой пробой (реакция Митсуда). Проба заключается в том, что 0,1 мл лепромина (препарата, представляющего собой взвесь убитых автоклавированием микобактерий лепры в физиологическом растворе с добавлением 0,5% фенола) вводится внутрикожно в область сгибательной поверхности предплечья. Результат реакции учитывается на 21-й день. Лепроминовая проба считается положительной, если на месте введения развивается инфильтрат диаметром 3 мм и более. Реакция обычно бывает положительной у преобладающего большинства здоровых лиц, а также у больных ТТ, и отрицательной — при лепроматозном типе заболевания.

Следовательно, лепроминовая проба имеет не диагностическое, а лишь дифференциальнодиагностическое и прогностическое значение, а также позволяет следить за динамикой резистентности организма к М. leprae.

Хотя перечисленные методы составляют основу лабораторной диагностики лепры, они недостаточно информативны на ранних стадиях заболевания, а также при малобактериальных формах болезни. Поэтому в настоящее время ведется поиск и разработка новых способов диагностики, позволяющих устанавливать инфицированность М. leprae при помощи серологического анализа на присутствие антигенов возбудителя или соответствующих антител в сыворотке крови тестируемого. Антитела к специфическому для микобактерий лепры ФГЛ-1 присутствуют у 90% больных с нелеченой лепроматозной лепрой и только у 40-50% больных малобактериальной лепрой и у 1-5% здоровых контрольных лиц.

С учетом установления некоторых генетических маркеров развития лепроматозных форм лепры (в частности для русской популяции — это HLA-DR3, DR2 и В7) рекомендуется проводить типирование по антигенам гистосовместимости как больных, так и контактирующих с ними лиц (в последнем случае с целью оценки степени риска заболевания).

Для обнаружения возбудителя лепры перспективно использование ПЦР, обладающей высокой чувствительностью и специфичностью, поскольку позволяет обнаруживать ДНК микобактерии лепры у 95% больных многобактериальными и у 55% — малобактериальными формами заболевания. Однако в настоящее время ПЦР не используется в клинической практике, так как стандартизированные праймеры все еще отсутствуют, а тест-системы проходят стадию разработки и апробации с целью выявления наиболее подходящих праймеров.

Интенсивное внедрение иммунологических методов в лепрологию дает основание надеяться на появление в ближайшее время тестов, которые позволят выявлять доклинические формы заболевания, что создаст предпосылки для более своевременного и эффективного лечения.

- Читать далее "Лечение и профилактика лепры"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 10.12.2019

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.