а) Методы выделения возбудителя из различных видов клинического материала. Обнаружение и изоляция Р. stutzeri проводится в основном двумя методами: (1) — обогащение культуры и выделение чистых культур и (2) — прямое обнаружение без проведения культивирования. Первый (элективный) метод специфического обогащения микроба с денитрифицирующим свойством и его выделение разработал Gerrit van Iterson, Jr., в 1902 г., а затем описали С. В. van Niel и М. В. Allen в 1952 г. Для этого была предложена минеральная среда с 2 % нитрата (анаэробные условия выращивания) и с тартратом (или малатом, сукцинатом, малонатом, цитратом, этанолом или ацетатом), которая должна была обеспечивать доминирование популяции Р. stutzeri, даже если некоторые изоляты оказывались неспособны расти на тартрате в чистой культуре. Селекция клеток на этой среде с необычной морфологией колоний показала высокий процент выявления Р. stutzeri.

Инкубация посевов при 37°С или выше позволила более эффективно проводить обогащение среды. Селективное обогащение микробом можно комбинировать с созданиями условий для денитрификации.

Для выделения Р. stutzeri из нескольких экосистем J. Sikorski et al. предложили двухступенчатую процедуру выделения микроба из внешней среды или от больных. 1-я ступень — индикация Р. stutzeii по модифицированной методике ПЦР, 2-я ступень — позитивные в ПЦР образцы высевали на чашки со средой из искусственной морской воды с добавлением этиленгликоля, крахмала или мальтозы как источника углерода. Культивирование проводили в аэробных условиях. По образованию характерных колоний микроба удается отделить Р. stutzeri от других микроорганизмов с частотой 10^-3—10^-4.

Для выделения используют чаще всего среды, предназначенные для культивирования псевдомонад.

б) Определение основных родовых и видовых признаков в целях идентификации Р. stutzeri. До введения геномных подходов при идентификации культур часто не распознавали Р. stutzeii по фенотипическим признакам и относили ее к Р. mendocina, Р. pseudoalcaligenes, Р. putida или к другим родам (Delftia acidovorans, Ralstonia pickettii Alcaligenes, Achromobacter). В некоторых коллекциях культуры Р. stutzeri маркированы как Р. saccharophila. Следует отметить, что наиболее близкие родственные отношения были между Р. stutzeri и Р. balearica, сходство которых установлено по результатам анализа 16 S рРНК. Дополнительно эти культуры могут быть идентифицированы также по фенотипическим свойствам.

К дифференциальным фенотипическим признакам Р. stutzeri относят: полное отсутствие роста при pH 4,5, утилизации гликогена (около 1 % положительны в API-стрипах), разжижения желатина. Микроб не осуществляет каталитическую конверсию аргинина в цитруллин и цитруллина в орнитин. Последнее является важным таксономическим признаком, т.к. штаммы Р. stutzeri дают в этих реакциях отрицательный результат (однако около 2 % с API-стрипами могут быть положительными).

Состав жирных кислот клетки является очень хорошим таксономическим маркером для дифференциации родов, ранее относившихся к Pseudomonas (например, для Burkholderia). Такая характеристика очень информативна, т. к. композиция жирных кислот Р. stutzeri, составленная из насыщенных кислот C_16:0, ненасыщенных С_16:1 и С_18:1, наиболее часта. Они составляют до 82,3 % всех жирных кислот Р. stutzeri. Помимо этого, обнаружены минорные количества гидроксилированных жирных кислот 3-ОН_10:0 и 3-ОН_12:0. По другим жирным кислотам существенных различий между геномоварами не имеется. Состав жирных кислот микроорганизма целесообразно определять при строго контролируемых условиях выращивания. Например, различие в жирнокислотном составе Р. putida и Р. stutzeri удалось вывить при деградации нафталина.

При идентификации важное значение имеет состав полиаминов и хинонов. Два крупных полиамина обнаружены в Р. stutzeri: путресцин с массой 35,0:92 мкмоль/г и спермидин с массой 8,9:9,2 мкмоль/г (по сухому весу). Путресцин — главный компонент всех Pseudomonas. Оба полиамина присутствуют только в небольших количествах. Убихинон Q-9 присутствует во всех штаммах Р. stutzeri. Клетки Р. stutzeri аккумулируют поли- β-гидроксибутират. Контролирующий ген (phaZPst) хорошо охарактеризован.

в) Определение чувствительности к антибактериальным препаратам. Лечение и профилактика инфекции. Для определения чувствительности микроорганизма к лекарствам используют стандартные методы. Возбудитель оказался чувствительным ко многим антибиотикам, по сравнению с Р. aeruginosa. Такую высокую чувствительность можно объяснить редким соприкосновением микроба с антибиотиками из-за его низкого уровня циркуляции в больничной среде. Однако, если бактериальные изоляты получены от иммуносупрессированных пациентов (например, пациентов с вирусом иммунодефицита человека), то значительных различий в антибиотикорезистентности между Р. aeruginosa и другими видами Pseudomonas spp., включая Р. stutzeri, не отмечено. Видимо, в данных случаях микроорганизм все-таки соприкасался с высокими дозами антибиотиков во время длительного лечения этих больных в стационаре.

Отметим, что за исключением фторхинолонов, устойчивые варианты Р. stutzeri выявлены по отношению ко всем группам антибиотиков. Следовательно, Р. stutzeri имеет широкий диапазон механизмов формирования резистентных форм. По крайней мере, описаны два механизма устойчивости к антибиотикам у Р. stutzeri: изменения в структуре мембранных белков и липополисахаридов и наличие β-лактамаз, которые разрушают природный и полусинтетический пенициллин, а также цефалоспорины и монобактамы со сходной активностью. Лечение проводят препаратами против псевдомонадных инфекций. Специфические профилактические препараты не разработаны.

- Читать далее "Флуоресцирующая псевдомонада (Pseudomonas fluorescens): морфология, культуральные, биохимические свойства"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.4.2020