Методы лабораторной экспресс-диагностики основаны на выборе наиболее важных дифференцирующих признаков для определения принадлежности бактерий к семейству и роду, а иногда и виду.

Предположительный лабораторный диагноз кампилобактериоза может быть поставлен при прямой микроскопии материала на основании характерной морфологии и подвижности кампилобактерий. Исследование может осуществляться с использованием фазово-контрастной микроскопии «висячей», «раздавленной» капли или световой микроскопии фиксированных и окрашенных мазков. Обнаружение в препарате типа «раздавленная капля» при фазовом контрастировании высокоподвижных извитых бактерий служит основанием для постановки предположительного лабораторного диагноза.

Опытный исследователь при помощи этого метода может поставить предположительный диагноз примерно 50% больным кампилобактериозами при условии, что образцы проб фекалий свежие (доставлены в лабораторию в течение 1 ч).

Вместе с тем утверждение о достаточности вышеуказанного способа для экспресс-диагностики кампилобактериоза нельзя считать абсолютно обоснованным, так как широкое его использование при отсутствии достаточных навыков приводит к росту числа ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Так, при бактериоскопическом изучении проб фекалий, положительных результатов было получено в 2,5 раза больше, чем при бактериологическом посеве.

При исследовании проб воды, наоборот, число находок кампилобактерий при прямой бактериоскопии оказалось в 9 раз меньше. Таким образом, объективность способа прямой бактериоскопии мазков нативного материала весьма сомнительна, а сам способ может расцениваться лишь как дополнительный метод исследования в диагностике кампилобактериоза.

Существует способ экспресс-диагностики кампилобактериоза при проведении фильтрации суспензии исследуемых фекалий больных ОКИ через стерильный ядерный фильтр (размер пор 0,45 или 0,54 мкм) непосредственно на предметное стекло, на которое предварительно нанесена капля солевого раствора, содержащего ростовые добавки. Предметное стекло с фильтратом исследуемой пробы помещают в термостатике) до полного высыхания фильтрата, после чего препарат окрашивают и изучают при световой микроскопии.

Обнаружение в мазке микроорганизмов, имеющих типичные для кампилобактерий признаки, позволяет уже через 1 ч после поступления пробы фекалий на исследование выдать предварительный ответ о наличии в ней кампилобактерий. Однако диапазон возможностей данного способа ограничен, и он может использоваться только при высокой концентрации кампилобактерий в исследуемой пробе (свыше 10⁷—10⁹ м.к./мл), т.е. у больных с манифестной клинической картиной кампилобактериоза. Способ позволяет обнаруживать практически любые виды, входящие в род Campylobacter. Их дальнейшая дифференциация требует получения чистой культуры и последующей идентификации.

Известен метод экстренной диагностики кампилобактериоза при помощи реакции латекс-агглютинации для выявления антигенов кампилобактерий в копрофильтратах больных ОКИ. Для этого иммунные кроличьи антисыворотки адсорбируют рядом энтеропатогенных бактерий. Специфический IgG адсорбируют на эпоксидированном латексе. Фекалии, доставленные на транспортной среде, осветляют центрифугированием и ставят реакцию агглютинации с латексным препаратом. Диагностическая значимость теста заключается в постановке предположительного лабораторного диагноза кампилобактериоза.

Метод ДНК-диагностики основан на комплементарном взаимодействии нуклеиновых кислот, которые позволяют с высокой точностью идентифицировать последовательность нуклеотидов в генах искомого микроорганизма.

Молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) основан на том, что в исследуемый образец, содержащий, предположительно, кампилобактерии, вносят синтезированные нуклеотидные последовательности (праймеры), комплементарные генетическому материалу искомого возбудителя, которые специфически взаимодействуют с ДН К кампилобактерий.

Для выявления возбудителей кампилобактериоза С. jejuni методом ПЦР существует тест-система КАМ — БАК (производится ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора). Эта тест-система представляет собой многокомпонентный набор для выявления ДНК методом ПЦР и состоит из четырех комплектов: 1) набор № 1 для выделения ДНК; 2) набор № 2 (праймеры) для проведения ПЦР; 3) набор № 3 для электрофоретического анализа продуктов ПЦР; 4) набор № 4 контрольных образцов. Чувствительность тест-системы составляет не менее 500 клеток в пробе (100 мкл). Взятие проб проводят согласно инструкции по применению тест-системы.

Одним из современных методов серологической идентификации и быстрого выявления микроорганизмов и их антигенов является реакция коагглютинации. Для ее проведения применяется поливалентная антисыворотка, на основе которой сконструирована соответствующая тест-система. Последняя не реагирует с антигенами других энтеробактерий (шигелл, сальмонелл, иерсиний).

- Читать далее "Серологическая диагностика кампилобактерий (Campylobacter, Arcobacter)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 14.1.2020