В условиях производственных лабораторий фармацевтических предприятий невозможно проводить микробиологический анализ, охватывающий все виды патогенных бактерий. Поэтому, согласно нормам Государственной Фармакопеи, не допускается наличия только определенных видов бактерий, которые наиболее часто встречаются в медицинских препаратах и представляют опасность для здоровья человека.

Это кишечная палочка, сальмонеллы, синегнойная палочка, золотистый стафилококк. Именно эти бактерии наиболее часто вызывают лекарственную инфекцию, которая сопутствует основному заболеванию. Кишечная палочка, кроме того, является показателем неудовлетворительных условий производства.

Несмотря на тот факт, что большинство нестерильных лекарственных средств (НЛС) принимают внутрь, в алгоритме определения микробной загрязненности лекарственных средств и пищевых продуктов имеются значительные различия. Основное различие состоит в следующем. При бактериологическом анализе пищевых продуктов, контаминированных микроорганизмами и ставшими вследствие этого причиной заболевания человека, задачей исследователя является выделение возбудителя пищевой инфекции из огромного разнообразия видов микроорганизмов.

В лекарственных средствах, напротив, немногочисленные патогенные микроорганизмы-контаминанты, которые, попав в организм человека, получают возможность роста и размножения, следует «накопить», поместив препарат вначале в среду обогащения. Поэтому методы, применяемые в фармацевтической микробиологии, имеют другую схему испытания, в значительной мере отличающуюся от той, которая используется в санитарной микробиологии.

Бактериологическое исследование НЛС предполагает:
— выделение и количественное определение энтеробактерий;
— выделение, идентификацию и количественное определение Escherichia coli;
— выделение и идентификацию Salmonella spp.;
— выделение и идентификацию Pseudomonas aeruginosa;
— выделение и идентификацию Staphylococcus aureus.

Для выявления патогенных бактерий из НЛС исследуемый препарат прежде всего помещают в жидкие питательные среды обогащения, элективные или селективные, а затем производят пересев бактериологической петлей на агаризованные дифференциально-диагностические среды. Получив изолированные колонии, определяют культурально-морфологические и тинкториальные свойства выделенного микроорганизма. Для окончательной идентификации и подтверждения определенной таксономической группы, к которой принадлежат бактерии, используют биохимические тесты.

При производстве лекарственных средств во время технологического процесса определенное число микробных клеток получает повреждения. При переносе препарата в селективные среды накопления, оказывающие то или иное токсичное действие на микроорганизмы, поврежденные клетки могут погибнуть. Поэтому в современных фармакопеях стран с развитой фармацевтической промышленностью рекомендуется применение жидких питательных сред для предварительной инкубации с целью вернуть жизнеспособность поврежденным микроорганизмам. Препарат выдерживают в течение 2-5 ч в среде предварительной инкубации, затем гомогенат переносят в среду обогащения.

а) Выделение и количественное определение энтеробактерий. Небольшую часть (10,0 гили 10,0 мл) исследуемого образца переносят в 100 мл лактозного бульона (среда №11), перемешивают и инкубируют при 32,5(±2,5)°С в течение, как правило, 2 ч, но не более пяти. После инкубации перемешивают содержимое флакона (гомогенат А) и переносят 10 мл (количество, соответствующее 1 г или 1 мл образца) в 100 мл среды обогащения (бульон Мосселя, среда №3). Посев инкубируют в течение 18-48 ч при температуре 32,5(±2,5)°С. При появлении роста делают пересев бактериологической петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда №4) и инкубируют при гой же температуре в течение 18-24 ч.

При испытании микробиологической чистоты трансдермальных пластырей 10 пластырей помещают в 500 мл лактозного бульона (среда №11), осторожно встряхивают, избегая вспенивания среды, в течение не менее 15 мин. 50 мл смыва пропускают через стерильный мембранный фильтр из нитратделлюлозы с диаметром пор 0,45 мкм, который переносят в 100 мл среды обогащения (бульон Моссе-ля, среда №3) и инкубируют при указанной выше температуре в течение 18-24 ч. При наличии роста в жидкой среде производят пересев петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда №4) и инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч для выделения энтеробактерий и других грамотрицательных микроорганизмов.

Появление на плотной среде колоний грамотрицательных палочек является свидетельством того, что исследуемый образец контаминирован вышеупомянутыми бактериями. Ниже приводится схема выделения энтеробактерий.

Для количественного определения энтеробактерий используют три пробирки с 9 мл бульона Мосселя или среды №3 в каждой. Гомогенат А в количестве 1 мл (соответствует 0,1 г образца) вносят в первую пробирку, тщательно перемешивают и переносят 1 мл (соответствует 0,01 г образца) во вторую пробирку, снова перемешивают и переносят 1 мл (соответствует 0,001 г образца) в третью пробирку, меняя пипетку после каждого шага. Посевы инкубируют в течение 24-48 ч при температуре 32,5(±2,5) °С.

В случае роста для подтверждения наличия энтеробактерий делают пересев петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда №4) и инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч. Появление на плотной среде колоний грамотрицательных палочек является положительным тестом, отсутствие роста—отрицательным тестом. Наиболее вероятное количество энтеробактерий и других грамотрицательных микроорганизмов в 1 г или 1 мл образца определяют по таблице ниже.

- Читать далее "Выделение, идентификация и количественное определение Escherichia coli в лекарственных средствах"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 18.10.2019