Небольшую часть (10,0 г или 10,0 мл) исследуемого образца переносят в 100 мл соевоказеинового бульона или среды №8, перемешивают и инкубируют в течение 18-24 ч. При наличии роста 1 мл после перемешивания переносят в 10 мл тетратионатного бульона или среды №12 и инкубируют в течение 16-24 ч. Делают пересев петлей на минимум 2 из 4 плотных диагностических сред (дезоксихолат-цитрат-агар, ксилоза-лизин-дезоксихолат-агар, агар с бриллиантовым зеленым, феноловым красным, с лактозой и сахарозой, висмут-сульфит-агар—среда №5) и инкубируют в течение 24-48 ч.

На дезоксихолат-цитрат-агаре бактерии из рода Salmonella образуют хорошо развитые бесцветные колонии. На ксилоза-лизиндезоксихолат-агаре — хорошо развитые красные колонии с черными центрами или без них. На агаре с бриллиантовым зеленым, феноловым красным, с лактозой и сахарозой — мелкие блестящие бесцветные, розовые или опалово-белые колонии, часто окруженные розовой или красной зоной. На висмут-сульфит-агаре (среда №5) бактерии из рода Salmonella образуют, как правило, черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом участок среды под колонией прокрашивается в черный цвет.

Колонии, подозрительные на принадлежность к роду Salmonella, микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек 2-3 характерные колонии (каждую отдельно) пересевают на трехсахарный агар с солями железа (среда №13), нанося большее количество культуры петлей сначала на скошенную часть агара, а потом уколом в столбик, не касаясь дна пробирки. Через 24 ч инкубации в столбике питательной среды отмечают изменение цвета с красного на желтый. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода—типичном признаке большинства видов рода Salmonella.

Параллельно ставят тест на наличие фермента цитохромоксидазы, используя чистую культуру со скошенного соевоказеинового агара или среды №1. Если требуется дополнительное подтверждение, можно использовать подходящие биохимические и серологические тесты.

Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано бактериями рода Salmonella (см. схему 6.4).

Исследуемый образец, разведенный стерильным буферным раствором 1:10, переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл) в 100 мл жидкой питательной среды (соевоказеиновый бульон, среда №8), перемешивают и инкубируют в течение 24-48 ч. При наличии роста пересевают петлей на селективную питательную среду для выделения синегнойной палочки (цетримидный агар, ЦПХ-агар (цетилпиридиний хлорид) — среда №16).

Выросшие колонии грамотрицательных палочек пересевают на среду №9 для выявления сине-зеленого пигмента ниоцианина. Посевы инкубируют в течение 24-48 ч.

Для подтверждения видовой принадлежности используют биохимический тест на наличие фермента цитохромоксидазы и способность выделенной культуры расти на соевоказеиновом бульоне или среде №8 при температуре 42(±1)°С в течение 18-24 ч.

При испытании микробиологической чистоты трансдермальных пластырей 10 пластырей помещают в 500 мл фосфатного буферного раствора, осторожно встряхивают в течение не менее 15 мин. 50 мл смыва пропускают через стерильный мембранный фильтр из нитрат целлюлозы с диаметром пор 0,45 мкм, который переносят в 100 мл соевоказеинового бульона или среды №8 и инкубируют в течение 24-48 ч. После инкубации при наличии роста пересевают петлей на селективные среды — цетримидный или ЦПХ-агар. Дальнейшую идентификацию проводят, как указано выше.

Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, выделяющие сине-зеленый пигмент пиоцианин, обладающие ферментом цитох-ромоксидазой и растущие при температуре 42(±1)°С, считают, что лекарственное средство контаминировано Р. aeruginosa.

- Читать далее "Выделение и идентификация Staphylococcus aureus в лекарственных средствах"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 18.10.2019