Исследуемый образец, разведенный стерильным буферным раствором 1:10, переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл) в 100 мл жидкой питательной среды (соевоказеиновый бульон, среда №8), перемешивают и инкубируют в течение 18-48 ч. 1 мл содержимого флакона переносят в 10 мл бульона Мак-Конки или среды №3. Посевы инкубируют в течение 18-24 ч.

При наличии роста в случае равномерного помутнения среды в пробирках делают пересев петлей на плотные среды—агар Мак-Конки или среду №4. Посевы инкубируют в течение 18-48 ч (агар Мак-Конки) или 18-24 ч (среда №4). На агаре Мак-Конки Е. coli образует красные неслизистые колонии, на среде №4 — малиновые неслизистые колонии с металлическим блеском, окруженные малиновыми зонами.

Подозрительные на принадлежность к E.coli колонии микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отдельные колонии отсевают на скошенный в пробирках соевоказеиновый агар (среду №1) и инкубируют в течение 18-24 ч для получения чистой культуры.

Для подтверждения используют биохимические тесты. Из пробирок с чистой культурой делают пересевы на агар Симмонса (среду №14) и соево-казеиновый бульон (среду №15), а также проводят тест на наличие фермента цитохромоксида-зы. Через 18-24 ч инкубации отмечают бактериальный рост или его отсутствие на агаре Симмонса (среде №14). Утилизацию цитрата устанавливают по смещению pH среды в щелочную сторону (изменению цвета среды с зеленого на синий). Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности соевоказеинового бульона (среды №15) при добавлении реактива Ковача.

Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано Е. соН. Схематически выделение и идентификация Е. coli приведены на схеме ниже.

Количественное определение Е. coli проводят таким же образом, как количественное определение других энтеробактерий, используя бульон Мак-Конки или среду №3. В случае равномерного помутнения среды в пробирках для подтверждения наличия Е. coli из каждой пробирки делают пересев петлей на плотную среду (агар Мак-Конки, среду №4). Посевы инкубируют в течение 18-48 ч (агар Мак-Конки) или 18-24 ч (среда №4).

Появление на средах характерных для Е. coli колоний грамотрицательных палочек является положительным тестом, отсутствие роста этих колоний— отрицательным тестом. Наиболее вероятное количество клеток E.coli в 1 г или в 1 мл образца определяют по таблице ниже.

- Читать далее "Выделение, идентификация Salmonella spp. и Р. aeruginosa в лекарственных средствах"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 18.10.2019