Безусловным критерием инвазивного микоза является выявление возбудителей в гистологических исследованиях. Fla начальном этапе исследования изучают препараты, окрашенные гематоксилин-эозином. Этот метод окраски выявляет реакцию тканей, распространенность грибного поражения и возможную сопутствующую инфекцию. Молодые дрожжевые клетки грибов (Candida, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum и др.), массивные скопления плесневых грибов хорошо окрашиваются в синий цвет различной интенсивности.

Однако старые, единичные, фагоцитированные элементы грибов, гифы плесневых микромицетов (особенно зигомицетов) окрашиваются слабо, что не влияет на дифференциацию темноокрашенных возбудителей (Altemaria, Aureobasidium, Cladosporium и др.). При исследовании препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином, часто наблюдаются диагностические ошибки из-за большого количества тканевых структур, имитирующих элементы грибов. Широко распространена окраска по Граму (в различных модификациях), при которой грибы значительно лучше воспринимают генциановый фиолетовый, чем гематоксилин.

Недостатки — низкая специфичность, плохо окрашиваются старые или отмирающие элементы грибов, у бластомицетов часто окрашивается весь гриб, а не только стенка, что затрудняет диагностику. Для лучшего выявления грибов в секционном материале рекомендуют специальные методы окраски: по Гомори—Гро-котту, при которой грибы принимают коричневато-черную окраску на бледно-зеленом фоне; реактивом Шиффа — грибы приобретают цвет от розового до пурпурного, фон — бледно-зеленый; по Гридли - возбудители окрашиваются в темно-розовый или пурпурный цвет, фон — желтый. Окраска муцикармином по Мейеру позволяет дифференцировать кринтококки от других грибов сходных размеров и форм; капсула принимает красную окраску, фон — желтую.

Для выявления грибных патогенов в гистологических срезах применяют также метод прямой иммунофлюоресценции с использованием красителей-флюорохромов (акридиновый желтый или акридиновый оранжевый) или 0,1%-ных растворов отбеливающих агентов (калькофлюоровый белый) с докрашиванием синькой Эванса.

Для постановки диагноза инфицирования грибами достаточно обнаружить в тканях единичные клетки гриба. В большинстве случаев в гистологических срезах не удается определить родовую принадлежность возбудителей, за исключением нескольких, имеющих характерные морфологические черты. Почкующиеся дрожжевые клетки и псевдомицелий характеризуют грибы рода Candida, округлые дрожжеподобные клетки, окруженные широкой неокрашенной зоной — Cryptococcus пео/ormans, дихотомически ветвящийся мицелий — грибы рода Aspergillus, полиморфные, сигаровидные и веретенообразные клетки — Sporothrix schenckii.

Возбудители хромомикоза при окраске гематоксилин-эозином проявляются в тканях буроватыми «склеротическими тельцами» с толстой двухконтурной оболочкой и продольнопоперечными складками. При окраске по Грокотту «склеротические тельца» окрашиваются в черный цвет, в этих случаях их нельзя отдифференцировать от других дрожжеподобных возбудителей. Выявление широкого несептированного мицелия свидетельствует о наличии зигомикоза, темноокрашенных плесневых элементов грибов (при окраске гематоксилин-эозином) — о феогифомикозе.

Одной универсальной методики в гистологической диагностике нет, каждая имеет свои недостатки. Поэтому для успешной дифференциальной диагностики необходимо проводить окраску материала одновременно несколькими способами.

- Читать далее "Иммунологический метод и ПЦР диагностика микозов (грибковой инфекции)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 1.6.2020