Предварительная подготовка материала к исследованию проводится в стерильном боксе или ламинаре, чтобы избежать контаминации образца грибами из окружающей среды.

а) Концентрация микроорганизмов. Некоторые материалы — например, смывы из бронхов, ликвор, мочу или аспираты — необходимо концентрировать для достижения оптимального выявления возбудителей. Этого достигают путем отстаивания жидких биосубстратов до выпадения осадков, центрифугированием или фильтрацией.

1. Центрифугирование. Материал переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10-15 мин. Надосадочную жидкость сливают или используют для иммунологических исследований (ликвор), а осадок разводят стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой в количестве 0,1-0,25 мл в достаточном объеме для посева и микроскопии.

2. Фильтрация. Материал, в том числе и кровь, фильтруют через мембранный фильтр с порами размером 0,45 мкм. Часть отфильтрованного биосубстрата микроскопируют, а фильтр помещают на поверхность плотной питательной среды.

б) Разжижение и гомогенизация образцов. Разжижение вязких биосубстратов (мокроты) и гомогенизация фекалий и тканей необходимы для повышения высеваемости грибов и количественного их учета.

1. Мокроту гомогенизируют путем смешивания с муколитиками (0,5 %-ный раствор ацетилцистеина), ферментами (трипсин, панкреатин) в равных долях, или механическим встряхиванием со стерильными стеклянными бусами. Гомогенизированный материал разводят стерильным физиологическим раствором или стерильной дистиллированной водой в соотношении 1:10.

2. Фекалии. Жидкий материал предварительно не обрабатывают. Более плотные образцы гомогенизируют стерильной дистиллированной водой или физиологическим раствором в разведении 1:10.

3. Ткани. Патологический материал разрезают стерильным скальпелем на фрагменты диаметром 0,5-1 мм. Большие куски можно растереть в стерильной ступке пестиком. Однако при подозрении на зигомикоз ткани не гомогенизируют, так как хрупкий мицелий зигомицетов разрушается при этой процедуре. Чтобы избежать риска поверхностной контаминации, материал промывают перед посевом раствором антибиотика, например, гентамицином (50 мг/мл).

- Читать далее "Микроскопия материала для диагностики микозов (грибковой инфекции)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 1.6.2020