Микроскопия материала для диагностики микозов (грибковой инфекции)

Микроскопия клинического материала — быстрый и простой метод предварительной диагностики заболевания. В случаях отсутствия роста возбудителя в культуре положительный результат прямой микроскопии может являться несомненным подтверждением микотической инфекции.

Патологический материал изучают в нативных и/или окрашенных препаратах. Нативные препараты исследуют в 10-20%-ном растворе КОН, в равных объемах спирта, воды и глицерина или в физиологическом растворе. Для лучшего просветления материала и достижения мацерации тканей используют комбинацию КОН и диметилсульфоксида (КОН/ДМСО).

Для выявления Cryptococcus spp. в исследуемый препарат добавляют каплю профильтрованной черной чертежной туши, благодаря чему при микроскопии на сером фоне становятся хорошо заметными почкующиеся клетки, окруженные светлыми капсулами.

Для окрашивания высохший мазок исследуемого материала фиксируют 96° спиртом, ацетоном или над пламенем горелки. Фиксированные мазки окрашивают 2 %-ной метиленовой синью, по Граму или по Романовскому-Гимзе.

Для лучшего выявления возбудителя в материале рекомендуется одновременно использовать несколько способов окраски. Эффективна методика выявления грибов с калькофлюоровым белым-модификация окраски с едким кали КОН. Капля красителя добавляется к препарату с КОН и изучается под люминесцентным микроскопом. Окрашенные клеточные стенки патогенов легко заметить по голубому или зеленому свечению.

а) Мокрота и смыв с бронхов. После предварительной обработки биосубстраты микроскопируют при малом (х100) и большом (х400) увеличении. Обнаружение в материале почкующихся дрожжевых клеток диаметром 4-14 мкм и псевдомицелия, характерных для грибов рода Candida, может свидетельствовать о колонизации нижних дыхательных путей или о вероятном наличии бронхо-легочного кандидоза. Также следует учитывать возможность попадания этих грибов в мокроту из ротовой полости при сборе материала.

Для окончательной диагностики кандидоза важен количественный учет грибов Candida, проводимый при культуральных исследованиях.

В мокроте и бронхосмыве при микроскопическом исследовании можно также определить другой дрожжевой возбудитель — Cryptococcus neoformans, который образует округлые почкующиеся клетки диаметром от 5 до 20 мкм. Полисахаридная капсула возбудителя на фоне исследуемого материала в тушевом препарате проявляется как широкая неокрашенная зона вокруг клетки.

Обнаружение в исследуемом материале фрагментов плесневого мицелия, конидиеносцев или конидий является этиологически значимым подтверждением инфицирования бронхолегочной системы мицелиальными грибами.

б) Цереброспинальная жидкость (ликвор). После центрифугирования ликвора осадок микроскопируют в капле туши или нигрозина для выявления неокрашенных капсул Ciyptococcus neofomians и окрашивают по Граму для исследования на почкующиеся дрожжевые клетки Candida. Выявление даже небольшого количества грибов является диагностически значимым.

в) Соскобы со слизистых оболочек полости рта, носовых ходов и гениталий. Соскобы окрашивают по Граму или Романовскому-Гимзе и исследуют под микроскопом. Положительный результат исследования: обнаружение в мазках почкующихся дрожжевых клеток, псевдомицелия, плесневого мицелия, является основанием для постановки диагноза.

г) Аспираты (перитонеальная, плевральная, синовиальная жидкости). После обработки биосубстратов осадок микроскопируют в нативных и окрашенных препаратах. Стерильные жидкости тела не содержат грибов, поэтому обнаружение даже единичных клеток оценивают как значимое.

д) Моча. Во время сбора мочи грибы рода Candida могут попасть в материал с кожи промежности, из вагины, с крайней плоти. В этих случаях выявление единичных дрожжевидных клеток не берется в расчет.

е) Гной. При мицетомах верхних и нижних конечностей гной, взятый из глубины пораженных участков и свищевых ходов, исследуют на наличие «зернышек» (друз) размером до 2 мм. Для этого материал смешивают с небольшим количеством физиологического раствора в чашке Петри и просматривают под лупой. Обнаруженные друзы или гной микроскопируют в КОН/ДМСО и окрашивают по Граму и Романовскому-Гимзе для дифференциальной диагностики друз, образующихся при актиномикозе и нокардиозе (возбудители — актиномицеты и нокардии), и эумицетомы (возбудители — плесневые грибы).

В случаях эумицетомы в нативном препарате хорошо видны широкие септированные гифы плесневого мицелия, при окраске гифы окрашиваются слабо и могут сливаться с окружающим фоном.

В случаях подкожных микозов в гное можно идентифицировать дрожжевые почкующиеся клетки и псевдомицелий Candida, дихотомически ветвящийся мицелий Aspergillus, буроватые, округлые клетки с толстой оболочкой и поперечными или продольными перегородками («склеротические тельца») возбудителей хромомикоза и сигаровидные или веретенообразные дрожжевые клетки возбудителя споротрихоза — Sporothrix schenckii.

ж) Ткани. Для нативного исследования в материал добавляют КОН/ДМСО и оставляют на 5-10 мин для мацерации ткани, затем препарат микроскопируют. Для лучшего выявления единичных клеток возбудителей применяют окраску калькофлюоровым белым с предварительным добавлением 10-20%-ного раствора КОН, препараты исследуют в люминесцентном микроскопе. Обнаружение в тканях даже единичных элементов грибов является диагностически значимым.

- Читать далее "Микологический (культуральный) метод диагностики микозов (грибковой инфекции)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 1.6.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.