а) Идентификация культур. Серогрупповую идентификацию выделенных культур проводят при помощи перекрестной реакции микроагглютинации лептоспир. Для этого необходимо располагать гипериммунными специфическими сывороткам против испытуемого и референтных эталонных штаммов, представляющих все известные серогруппы.

Штаммы относят к одной серогруппе, если титры РМА изучаемого штамма с референс-антисывороткой и референс-шгамма с антисывороткой к изучаемому штамму превышают 10%. Серогруппы не имеют официального таксономического статуса. Поэтому следующим этапом идентификации является определение серовара лептоспир (основной таксон).

После выяснения серогрупповой принадлежности штамма исследования проводят при помощи перекрестной РМА, но уже со штаммами, представляющими все серовары серогруппы, к которой выделенный штамм проявил наибольшее сродство. Эталонные штаммы и антисыворотки к ним, прореагировавшие хотя бы с одной стороны на 10% и более, отбирают для сравнения с опытным штаммом в перекрестных реакциях абсорбции.

Идентификацию штаммов лептоспир на уровне серогруппы, серовара и субсеро-вара можно проводить также в РМА с панелями моноклональных антител.

Генетические методы видовой и внутривидовой идентификации лептоспир пока находятся в стадии разработки и не могут быть рекомендованы для практического использования.

В связи с тем, что методы внутривидовой идентификации лептоспир достаточно сложны и трудоемки, выделенные от людей животных или объектов внешней среды изоляты следует направлять для идентификации в Центр Минздравсоцразвития России по лептоспирозам (на базе лаборатории лептоспирозов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН).

б) Хранение культур лептоспир. Штаммы лептоспир, постоянно поддерживаемые в лаборатории, можно хранить в пробирках под вазелиновым маслом или в запаянных ампулах. Лептоспиры консервируют после выращивания в сывороточной среде до максимального накопления. В пробирку на культуру наслаивают 0,25 мл или 5 капель стерильного вазелинового масла или культуру разливают в стерильные ампулы из нейтрального стекла и запаивают. Хранят пробирки и ампулы в темном месте при комнатной температуре. В таких условиях лептоспиры можно хранить без пересевов в течение 6 мес. Для длительного хранения штаммов используют также полужидкие среды, содержащие 0,2% агара.

При необходимости длительного сохранения лептоспир их помещают в паровую (-168°С) или жидкую фазу (-196°С) жидкого азота. Предварительно культуру с добавленным стерильным глицерином в конечной концентрации 5-10% охлаждают со скоростью 35 или 60 об/мин (от 0 до -130°С).

Рабочие музейные штаммы можно хранить и при -70°С. В этом случае нет необходимости добавлять глицерин в среду.

Для обеззараживания чистых культур лептоспир рекомендуется использовать 2%-ный раствор соляной кислоты с экспозицией 24 ч, а патологического материала — 5%-ный раствор фенола с экспозицией 2 ч.

При работе с лептоспирами следует пользоваться посудой из нейтрального или химического стекла.

- Читать далее "Экспресс-ПЦР-диагностика лептоспир (Leptospira)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 7.2.2020