Современная лабораторная диагностика инфекционных болезней не обходится без иммунологических методов, при помощи которых можно решать целый спектр задач, связанных не только с иммунодиагностикой, но и с прогнозированием течения и исхода инфекционного заболевания.

К ним относятся методы, основанные на реакциях связывания комплемента, микропреципитации, агглютинации, пассивной гемагглютинации. Но наибольшее распространение приобрел метод фермент-зависимого иммуносорбционного анализа — ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent assay), или твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), который разработали в 1971 г. Энгвалл и Пэлманн (Engvall, Perlmann, 1971) и независимо от них Ван Веемен и Шуурс (Van Weemen, Schuurs, 1971).

Принцип метода заключается в том, что специфические иммунные комплексы (ИК) образуются на твердой фазе, предварительно обработанной антигенами или антителами, и выявляются при помощи универсальных ферментных меток в ходе реакции энзим-субстрат.

ИФА в десятки и сотни раз превосходит перечисленные методы по чувствительности и специфичности. Используя этот метод, можно выявлять до 0,1 нг/мл вещества. Благодаря высокой автоматизации исследований ИФА является более технологичным и простым как при выполнении, так и при учете результатов.

Перечисленные свойства ИФА позволяют быстро и в большом объеме проводить качественные и количественные исследования специфических противомикробных антител (Ат), относящихся к различным классам и подклассам иммуноглобулинов; циркулирующих антигенов (Аг), а также интерлейкинов (Ил), как в биологических жидкостях (сыворотка и плазма крови, ликвор, слюна, моча), так и на уровне одной клетки в культуре in vitro.

Схема проведения ИФА определяется целями исследования. При иммунодиагностике инфекционных заболеваний качественное определение Ат и Аг проводится такими модификациями метода как непрямой твердофазный ИФА, ИФА — «ловушка» для иммуноглобулинов класса М, «сэндвич» ИФА. Для количественного определения Ат или Аг часто используется конкурентный твердофазный ИФА. Имеются тест-системы для одновременного определения Ат и Аг.

- Читать далее "Схема проведения непрямого твердофазного ИФА"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 31.08.2019