Многие виды бактерий, преимущественно патогенные и условно-патогенные, продуцируют вещества белковой природы, способные вызывать ферментативное разрушение эритроцитов с высвобождением гемоглобина.

Определение гемолизина используют для дифференциальной видовой диагностики гемолитических стафилококков, стрептококков и зеленящих стрептококков, энтерококков. Гемолитическая активность стафилококка расценивается как один из показателей потенциальной патогенности микроорганизма.

Тест основан на выявлении гемолиза in vitro при культивировании испытуемых микроорганизмов на кровяном агаре. Соответственно тем изменениям кровяного агара, которые возникают в среде при культивировании на ней гемолитических микроорганизмов, различают две формы проявления гемолиза:

β-Гемолиз с разрушением эритроцита и полным ферментативным расщеплением гемоглобина, результатом чего является образование вокруг колоний гемолитических штаммов микроорганизмов прозрачных зон обесцвеченной среды.

α-Гемолиз, характеризующийся частичным разрушением эритроцитов и окислением железа (FeII → FeIII) простетической группы с превращением гемоглобина в метгемоглобин и образованием вокруг колонии зоны частичного гемолиза с зеленоватым или зеленовато-коричневым ореолом.

Интенсивность проявления β- и α-гемолиза в известной степени зависит от вида животного, явившегося донором кровяного агара. Так, например, S. pyogenes, выращенный на агаре с овечьей кровью, образует более четкие прозрачные и широкие зоны гемолиза, чем те же самые штаммы, выращенные на агаре с кроличьей и тем более человеческой кровью, на которой в отдельных случаях гемолиз вовсе не проявляется.

Техника постановки теста. В МПА или другую питательную среду, пригодную для определения гемолитических свойств микроорганизма, добавляют 5% дефибринированной крови. Чашку Петри делят на сектора и каждый сектор засевают исчерпывающим штрихом одним из штаммов испытуемого микроорганизма. Засеянные чашки инкубируют при 36(±1)°С в течение 20-24 ч.

Некоторые гемолизины легко разрушаются кислородом воздуха, поэтому для предотвращения действия кислорода посев производят на питательную среду без крови, а затем на него наслаивают 10 мл 5% кровяного агара.

Вокруг колоний, находящихся в толще агара, гемолиз проявляется более четко.

Положительный контроль:
β-Гемолиз — S. pyogenes (серологические группы А, С, G), S. aureus, Enterococcus faecalis (с кровью кролика, человека, лошади), Enterococcus durans, L. monocytogenes, L. ivanovii.
α-Гемолиз — S. pneumoniae, S. salivarius, S. oralis, Enterococcus faecium.

- Читать далее "CAMP-тест (метод Christiae — Atkins — Munch — Peterson)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 7.06.2019