Источником серы — одного из важнейших химических элементов, необходимых для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов, служат серосодержащие аминокислоты — цистеин, цистин, метионин, а также неорганические соединения серы (сульфаты и тиосульфиты*).

*Сульфаты — неорганические соли серной кислоты (H₂SO₄), например, K₂SO₄, Na₂SO₄, MgSO₄, (NH)₂SO₄ и др. Тиосульфатные неорганические соли тиосерной или серноватистой кислоты (H₂S₂O₃) — K₂S₂O₃, Na₂S₂O₃, (NH)₂S₂O₃, MgS₂O₃.

Для того чтобы сульфаты и тиосульфаты вступали в реакцию биосинтеза, микроорганизмам необходимо восстановить их до сероводорода (H₂S) —газообразного токсического соединения с резким неприятным запахом тухлых яиц. Этот процесс катализируют сульфатредуктазные энзимы, продуцируемые многими энтеропатогенными и другими группами патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Тест основан на культивировании испытуемого микроорганизма на питательных средах, ингредиентами которых являются источники H₂S (серосодержащие аминокислоты или неорганические соединения серы — сульфаты и тиосульфаты), способные к ферментативному высвобождению сернистых соединений. Процесс образования H₂S происходит в кислой среде, и для его выявления необходим соответствующий индикатор (соли железа или свинца), с которыми H₂S вступает в соединение, образуя коричнево-черный преципитат — сульфат железа или сульфат свинца.

Техника постановки теста:

Вариант 1. Для выявления сероводорода в культурах семейства энтеробактерий посев материала производят на дифференциально-диагностические среды Клиглера, TSI или Олькеницкого (рецептура сред и механизм их действия приведены во II томе руководства в разделе кишечных инфекций). Для исследования образования сероводорода всеми другими видами патогенных и условно-патогенных микроорганизмов может быть рекомендована среда Хоменко «свинцовый агар». На этой среде засеянные в столбиках агара культуры образуют сероводород в течение 4 ч инкубации в термостате, который определяется по потемнению среды по линии укола.

Учет результатов. Независимо от состава среды, используемой для постановки сероводородного теста, положительный результат реакции базируется на восстановлении сульфатов в сульфиты, которые, вступая в реакцию с индикатором (соли железа (II) или свинец), образуют выпадающий в осадок преципитат черного цвета.

Вариант 2. Определение сероводорода при помощи индикаторной бумаги — бумажных индикаторных полосок, пропитанных ацетатом свинца (СН3СОО)₄Pb. Этот вариант более чувствителен, чем описанный выше.

Питательный бульон разливают в пробирки по 8-10 мл, инокулируют суточной бульонной культурой, испытуемой на образование H₂S. Вместо жидкой питательной среды могут быть использованы плотные среды.

В пробирки с засеянными средами опускают полоски индикаторной бумаги так, чтобы свободные концы их были на 1,5-2 см выше уровня питательной среды. Наружный конец полосы отгибают на 1-1,5 см через край пробирки и плотно прижимают к ней пробкой. Посевы инкубируют в термостате при 36(±1)°С в течение 18-24 ч (для некоторых микроорганизмов требуется более длительная инкубация).

Учет результатов. При положительном результате реакции нижний конец индикаторной полоски окрашивается в темно-серый или черный цвет, при отрицательном результате изменения цвета индикаторной бумаги не наблюдается.

Положительный контроль: Edwardsiella tarda, Proteus vulgaris, Salmonella typhimurium.

Отрицательный контроль: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae.

- Читать далее "Тест на плазмокоагуляцию в идентификации микроорганизмов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 7.06.2019