Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Подготовка материала для электронной микроскопии. Подготовка материала к окраске

Препараты для электронной микроскопии должны быть очень тонкими, не толще 0,1 u, так как иначе будут поглошаться проходящие через препарат электронные лучи. Это обусловливает особую технику изготовления тонких препаратов. Большое применение имеет способ нанесения взвеси на тонкую органическую пленку, которая служит в этом случае «предметным стеклом». Пленки изготовляются из 0,5—1,5% раствора коллодия в амилацетате.

Если каплю такого раствора опустить на поверхность воды, то капля растекается по поверхности и после испарения амилацетата остается тончайшая пленка толщиной в 0,01—0,001 u, через которую электронные лучи проходят почти без поглощения. На металлический диск диаметром 2—4 мм и с отверстием в центре 0,05—0,1 мм или на диски из мелкой металлической сетки (до 100 отверстий на 1 мм2) вылавливают коллодиевую пленку. Исследуемый объект наносят на пленку в виде взвеси или тончайшего среза.
Каплю соответствующей взвеси проволочной петлей или пипеткой наносят на пленку. После испарения жидкости на пленке остается тонкий слой исследуемого объекта.

Новейшим способом увеличения контрастности изображения препарата является метод теневых покрытий. Этот метод состоит в том, что под малым углом к плоскости препарата на него наносят тонкий слой паров металла. На неровностях объекта этот металл оседает, отбрасывая тень на противоположную сторону. Чем больше крутизна неровности объекта, тем больше осядет металла. Такие препараты в электронном микроскопе дают весьма контрастные изображения.
Для теневых покрытий применяют золото и хром. Испарение металла производится в вакууме накаленной спиралью из этого металла.

Правильное понимание электронных препаратов и их микрофотографий требует значительного опыта, так как следует учитывать ряд изменений, связанных с особенностями приготовления препарата и его пребыванием в потоке электронов.

электронная микроскопия

Подготовка материала к окраске

Предметные стекла для нанесения на них препарата должны быть чистые, обезжиренные. Для этого их промывают водой, насухо вытирают, опускают минут на 10—15 в банку со смесью Никифорова (спирт и эфир в равных частях). Банка со смесью Никифорова должна быть всегда закрыта плотной стеклянной притертой пробкой.

Чистым пинцетом вынимают предметные стекла из банки и вытирают. Посеревшие от долгого употребления стекла вначале обрабатывают технической серной кислотой, промывают проточной водой, затем кипятят в мыльной воде либо в 2% растворе соды, после чего вновь промывают водой, вытирают и обрабатывают смесью Никифорова.

Исследуемый материал, взятый прокаленной петлей или пипеткой, наносят на обработанное, как указано выше, предметное стекло. Если материал сухой, то предварительно наносят на предметное стекло каплю стерильного физиологического раствора или воды, куда опускают материал, размешивают и этой же петлей размазывают по стеклу тонким слоем. Полученный мазок сушат на воздухе, затем фиксируют троекратным проведением чистой стороны стекла над пламенем спиртовой горелки.
Фиксирование препарата должно быть не очень горячим, чтобы стеклом можно было прикоснуться к тыльной стороне руки, не обжигаясь при этом.

Если приходится для приготовления препарата взять несколько раз один и тот же материал, петлю надо каждый раз прокаливать перед взятием и уже охлажденной касаться очага или культуры.
При исследовании жидкого материала его наносят петлей на чистое предметное стекло и размазывают на нем тонким слоем.

Для приготовления препарата-отпечатка пользуются стерильными предметными стеклами. В стерильных условиях обнажается эрозия и к ней прикасаются предметным стеклом. На одном предметном стекле, в зависимости от условий взятия материала, можно сделать два, три отпечатка. Отпечатки высушиваются на воздухе, фиксируются и окрашиваются соответствующим способом.

- Читать далее "Методы окраски препаратов. Окраска по методу Синева и метиленовым синим"

Оглавление темы "Микроскопия и подготовка препаратов к микроскопии":
1. Микроскопическое исследование. Подготовка материала для микроскопического исследования
2. Темнопольная микроскопия. Техника темнопольной микроскопии
3. Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии
4. Подготовка материала для электронной микроскопии. Подготовка материала к окраске
5. Методы окраски препаратов. Окраска по методу Синева и метиленовым синим
6. Окраска кислотоустойчивых микробов. Окраска микробов по Граму
7. Окраска по Романовскому-Гимза. Окраска спор
8. Приготовление питательных сред. Требования к питательным средам
9. Взятие малых количеств крови. Как брать кровь из пальца для исследований?
10. Приготовление мазков крови. Взятие крови для определения СОЭ