Рецепты кислотно-основных индикаторов для окрашивания бактериальных препаратов
Кислотно-основные индикаторы (лат. indicator—указатель) — это группа растворимых органических соединений, которые меняют свой цвет при изменении концентрации ионов водорода H+, т.е. pH среды. Это происходит потому, что при установлении определенного значения pH изменяется структура и, следовательно, окраска хромогенных групп. Индикаторами, как правило, являются вещества, которые сами подвергаются окислению или восстановлению, причем их окисленная и восстановленная формы имеют различную окраску.
Наиболее отчетливое изменение окраски индикатора наблюдается в точке рТ (показатель титрования), которая соответствует конкретному для каждого индикатора значению pH. В этой точке происходит процесс отдачи или присоединения протонов к молекуле индикатора с изменением хромофорной группы.
Индикаторы подразделяются на одноцветные, изменяющие тон в связи с изменением pH, и двухцветные.
Кроме индикаторов, представляющих собой определенные химические вещества, широкое применение в практике находят комплексы соединений — смеси нескольких химических индикаторов с различными интервалами перехода, многократно меняющие окраску при различных значениях pH.
В микробиологической практике кислотно-основные свойства индикаторов используются, главным образом, при приготовлении дифференциально-диагностических сред, позволяющих выявить способность исследуемых микроорганизмов ферментировать углеводы, азотистые соединения, воздействовать на различные химические добавки к питательной среде, изменяющие pH в сторону увеличения кислотности или щелочности с изменением цвета колоний микробов и питательной среды.
Рецепт 42. Лакмусовая настойка. Коммерческий лакмус представляет собой кусочки твердого вещества серовато-желтого цвета. Для приготовления лакмусовой настойки эти кусочки в фарфоровой ступке измельчают в мелкий порошок, экстрагируют в течение 3 сут. в термостате при 37 °С в десятикратном объеме 96% спирта, ежедневно меняя его. Затем спирт сливают, осадок высушивают в термостате. Сухой осадок заливают десятикратным объемом дистиллированной воды и после трехдневного настаивания при комнатной температуре фильтруют.
В кислой среде лакмусовая настойка приобретает красноватую окраску, в щелочной — синюю.
В темном месте и хорошо закрытом флаконе лакмусовая настойка может сохраняться длительное время.
Рецепт 43. Индикатор бромтимоловый синий:
Бромтимоловый синий — 0,4 г
Гидроксида натрия децинормальный раствор — 6,4 мл
Вода дистиллированная — 100 мл
Бромтимоловый синий (0,4 г) растворяют в 40 мл дистиллированной воды, нагрев ее до кипения. После этого к раствору прибавляют 6,4 мл децинормального раствора гидроксида натрия, в результате чего жидкость приобретает зеленоватый цвет, и доливают до 100 мл дистиллированной водой.
Приготовленный таким образом индикатор может сохраняться длительное время в темном месте в склянке, закрытой притертой пробкой.
Бромтимоловый синий позволяет определять изменения реакции среды в пределах pH 6,0-7,7.
Рецепт 44. Индикатор Андреде. Наиболее широкое применение индикатор Андреде находит при изготовлении дифференциальных сред Гисса для выявления окисления и ферментации входящих в их состав углеводов.
Фуксин кислый — 1,0 г
Натрия гидроксид 1 N раствор — 64 мл
Вода дистиллированная — 400 мл
Фуксин кислый растворяют в гидроксиде натрия, после растворения краски прибавляют 400 мл дистиллированной воды, настаивают 24 ч при 37° С в течение суток. Последующие двое суток держат на свету при комнатной температуре. Сохраняют во флаконе темного стекла с резиновой или хорошо притертой стеклянной пробкой.
Рецепт 45. Индикатор ВР. Комбинированный индикатор, представляющий собой смесь водно-голубого и розоловой кислоты. Применяется при изготовлении коммерческих сухих питательных сред. В кислой среде имеет синюю окраску, в щелочной — красную, при нейтральной реакции бесцветен. Действует в диапазоне pH 4,5-8,0.
Рецепт 46. Индикатор Кларка. Готовят в виде спиртовых и водных растворов. Для определения реакции пользуются водными 0,1% растворами, поскольку они более чувствительны, чем спиртовые. Спиртовые 1,6% растворы используют для приготовления специальных питательных сред.
Для приготовления 0,1 % водного раствора берут навеску индикатора и растирают в порошок с 1/20 N раствором гидроксида натрия. Для разных индикаторов требуются разные объемы гидроксида натрия.
После растворения в щелочи к каждому индикатору добавляют дистиллированную воду до 25 мл и получают 0,4 % основные растворы, которые хранят впрок в склянках темного стекла с притертыми пробками. При изготовлении питательных сред основные растворы разводят дистиллированной водой до 0,02-0,04 % по мере необходимости.
Рецепт 47. Универсальный индикатор (коммерческий). Коммерческий реактив «Универсальный индикатор» представляет собой набор нескольких индикаторов розовато-красного цвета, изменяющегося в зависимости от pH среды.
Диапазон чувствительности этого индикатора очень широкий (от pH 2,0 до 9,0, интервал—около 1,5-2,0 единиц pH), поэтому его используют лишь для ориентировочного определения реакции раствора или среды. Способ приготовления указан на этикетке. Изготовитель: Государственный шосткинский завод химических реактивов.
Рецепт 48. Универсальные индикаторы:
1. В 500 мл 96% спирта растворяют 100 мг фенолфталеина, 200 мг метилового красного, 300 мг метилового желтого, 400 мг бромтимолового синего, 500 мг тимолового синего, затем прибавляют 0,1 Н раствор NaOH до появления чисто-желтой окраски (pH = 6).
2. Смешивают 15 мл 0,1% раствора метилового желтого, 5 мл 0,1% раствора метилового красного, 20 мл 0,1 % раствора бромтимолового синего, 20 мл 0,1 % раствора фенолфталеина, 20 мл 0,1 % раствора тимолфталеина.
3. В 100 мл 50 % спирта растворяют 70 мг тропеолина, 100 мг метилового оранжевого, 80 мг метилового красного, 400 мг бромтимолового синего, 500 мг фенолфталеина и 100 мг ализаринового желтого Р.
- Читать далее "Рецепты кислотно-основных буферных растворов для окрашивания бактериальных препаратов"
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.09.2019
- Рецепты растворов для окрашивания бактериальных препаратов
- Рецепты кислотно-основных индикаторов для окрашивания бактериальных препаратов
- Рецепты кислотно-основных буферных растворов для окрашивания бактериальных препаратов
- Рецепты питательных сред: мясная вода, пептонная вода, мясопептонный бульон
- Рецепты питательных сред: мясопептонный агар, питательный бульон
- Рецепты питательных сред: трептический перевар, бульон, агар Хоттингера
- Рецепты питательных сред: сахарный бульон, сахарный агар, реактивы на оксидазу
- Рецепты питательных сред: молоко с метиленовым синим, лакмусовое молоко в прописи Минкевича, среда для определения редукции ТТХ
- Рецепты питательных сред: цветные среды Гисса с углеводами
- Рецепты питательных сред: пептонная вода для ферментации углеводов, бульон с феноловым красным