Рецепты питательных сред: трептический перевар, бульон, агар Хоттингера

Рецепт 64. Трептический перевар Хоттингера. Говяжье мясо освобождают от костей, жира, сухожилий, нарезают мелкими кусочками, взвешивают и опускают в кипящую воду из расчета 1 кг мяса на 1000 мл воды. Мясо кипятят в течение 15-20 мин, затем вынимают и пропускают через мясорубку.

Бульон смешивают с фаршем и сливают в бутыль с таким расчетом, чтобы 1/3 бутыли оставалась свободной. К горлышку бутыли подбирают хорошо пригнанную резиновую пробку. Смесь подщелачивают 20 % раствором питьевой соды до pH 7,9(±0,1), прибавляют очищенную от жира, соединительной ткани и дважды пропущенную через мясорубку поджелудочную железу в количестве 10% от имеющегося объема (на 1000,0 мл жидкости 100,0 г железы). Вместо поджелудочной железы можно прибавить панкреатин в количестве 0,5 % и более в зависимости от его активности.

Через 1-2 ч после добавления фермента проверяют реакцию перевара и подщелачивают его повторно до pH 7,4(±0,1). Отсутствие сдвига реакции смеси в сторону окисления после прибавления фермента указывает на недоброкачественность последнего.

Содержимое бутыли тщательно перемешивают, добавляют хлороформ из расчета 10,0-30,0 мл на каждый литр перевара. Бутыль плотно закрывают резиновой пробкой и ставят в термостат при 37 °С на 7-10 сут.

В течение первого дня содержимое бутыли перемешивают вначале каждые 15-20 мин, затем через 2-3 ч, а в последующие дни — по нескольку раз в день, открывая при этом пробку для выхода избытка паров хлороформа.

Во время стояния в термостате мясо ферментируется, превращаясь в однородный осадок серовато-желтого цвета, а жидкость из мутно-серой становится прозрачной соломенно-желтого цвета. Об окончании переваривания судят по образованию триптофана, обнаруживаемого следующим образом. В пробирку наливают 3-4 мл фильтрованного перевара, добавляют 3-4 капли бромной воды. При наличии триптофана жидкость приобретает розово-фиолетовый цвет.

Определяют содержание аминного азота. Аминный азот — суммарное количество свободных аминокислот в гидролизате белка. При описанном способе переваривания гидролизат содержит не менее 5,0-8,0 г/л аминного азота. Перевар разливают в бутыли и стерилизуют 30 мин при температуре 120 °С.

Триптический перевар Хоттингера содержит смесь продуктов распада белков, образующихся при гидролизе мышечной ткани ферментами поджелудочной железы.

Действие ферментов приводит к полному гидролизу белка. В результате этого образуются пептоны, представляющие собой смесь пептидов и аминокислот, которые для микроорганизмов служат основным источником азота, фосфора, серы, витаминов и других веществ, необходимых для их роста.

При ферментном гидролизе, более мягком по сравнению с кислотным, по-видимому, в осколках пептидов сохраняются лабильные факторы роста. Многие микроорганизмы более активно размножаются на питательных средах, содержащих пептиды, которые усваиваются лучше, чем отдельно взятые аминокислоты или коммерческие препараты, содержащие менее гидролизованные продукты белка, чем пептоны.

Среды, приготовленные на триптическом переваре Хоттингера, более питательны, чем среды на пептонной или мясной воде с добавлением говяжьего и дрожжевого экстрактов.

P.S. Приготовление бромной воды. На 100,0 мл дистиллированной воды берут 3-3,5 мл чистого брома для получения насыщенного раствора. Хранят в склянке темного стекла (не на свету).

Рецепт 65. Бульон на основе перевара Хоттингера. Питательный бульон предназначен для выращивания и изучения свойств широкого спектра микроорганизмов.

Основной перевар Хоттингера разводят в несколько раз дистиллированной или водопроводной водой до конечного содержания аминного азота (г/л), требуемого для каждой группы микроорганизмов, добавляют 0,5 % натрия хлорида, 0,1 % дигидрофосфата калия, устанавливают pH 7,5(±0,2) и кипятят 15-20 мин.

Приготовленный бульон фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, разливают во флаконы или пробирки, стерилизуют 20-30 мин при 121 °С.

Рецепт 66. Агар на основе перевара Хоттингера. Среда предназначена для выделения, культивирования и изучения свойств микроорганизмов различных таксономических групп.

В бульон Хоттингера, подогретый до температуры 50-60 °С, вносят мелко нарезанный, хорошо промытый агар из расчета (по мере необходимости) 15-25 г на 1000 мл. Периодически помешивая, доводят до кипения для полного растворения агара. В горячем состоянии среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы или колбы, стерилизуют в автоклаве 30 мин при температуре 121 °С. Для использования разливают в чашки Петри или пробирки.

- Читать далее "Рецепты питательных сред: сахарный бульон, сахарный агар, реактивы на оксидазу"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.09.2019

Оглавление темы "Рецепты препаратов и питательных сред.":
  1. Рецепты растворов для окрашивания бактериальных препаратов
  2. Рецепты кислотно-основных индикаторов для окрашивания бактериальных препаратов
  3. Рецепты кислотно-основных буферных растворов для окрашивания бактериальных препаратов
  4. Рецепты питательных сред: мясная вода, пептонная вода, мясопептонный бульон
  5. Рецепты питательных сред: мясопептонный агар, питательный бульон
  6. Рецепты питательных сред: трептический перевар, бульон, агар Хоттингера
  7. Рецепты питательных сред: сахарный бульон, сахарный агар, реактивы на оксидазу
  8. Рецепты питательных сред: молоко с метиленовым синим, лакмусовое молоко в прописи Минкевича, среда для определения редукции ТТХ
  9. Рецепты питательных сред: цветные среды Гисса с углеводами
  10. Рецепты питательных сред: пептонная вода для ферментации углеводов, бульон с феноловым красным
Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.