Углеводные среды применяют для дифференциации бактерий по способности ферментировать углеводные субстраты.

При ферментации углеводов образуется смесь кислот (молочной, уксусной и др.), которые снижают значение pH. Конечные продукты ферментации углеводов и спиртов в большинстве случаев газообразные вещества (водород и углекислый газ).

Для обнаружения ферментации углеводов в среды Гисса вводят индикатор (индикатор Андреде, ВР-водно-голубой и розоловую кислоту, бромтимоловый синий и др.). Для выявления газообразования в жидких средах применяют трубки Durhem — поплавки (маленькие трубочки, запаянные с одного конца). Образующийся газ вытесняет жидкость из поплавков. Пузырьки, заполненные газом, находятся у запаянного конца трубки. О процессе газообразования в полужидких средах судят по пузырькам, разрывам или трещинам, появляющимся в толще агара.

Среды различаются по составу питательных субстратов с целью обеспечения возможности их применения для определения ферментации углеводов у бактерий с различными потребностями в питательных компонентах и биологически активных добавках, представленных антибиотиками, витаминами или определенными химическими соединениями.

Рецепт 73. Цветные среды Гисса с углеводами (жидкие):
Пептон — 10,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Углевод — 5,0-10,0 г
Индикатор Андреде — 10 мл
(или 1 мл 1,6% раствора бромтимолового синего)
pH 7,2(±0,2)

К 1000 мл дистиллированной воды прибавляют 10 г пептона и 5,0 г натрия хлорида. Пептон и соль растворяют при нагревании воды в течение нескольких минут, фильтруют через бумажный фильтр, так чтобы среда была совершенно прозрачной. Устанавливают pH. Прибавляют индикатор, 10 г одного из необходимых углеводов (лактозы, глюкозы, маннита, целлобиозы или 5,0 г крахмала, декстрина, гликогена), а затем индикатор Андреде из расчета 10 мл на 1000,0 мл среды или 1 мл раствора 1,6% индикатора бромтимолового синего.

Готовую среду разливают по 3,0 мл в пробирки вместе с поплавками, расположенными запаянным концом кверху. Среду стерилизуют при 112°С в течение 20 мин. Во время стерилизации поплавки доверху заполняются питательной средой.

Готовая среда бесцветная или имеет розоватый оттенок с индикатором Андреде и травянисто-зеленый цвет — с индикатором бромтимоловым синим.

Питательной основой сред для определения ферментации углеводов является пептонная вода (см. рецепт 59). Мясной бульон для этой цели не пригоден, так как он содержит различные углеводы, что может привести к получению ложных результатов.

В результате роста бактерий, сопровождающегося расщеплением углеводов с образованием кислых продуктов распада, цвет среды изменяется: в первом случае она становится ярко-розовой, во втором — желтой. Образование газа в среде определяют по наличию пузырьков, собирающихся в поплавке.

Рецепт 74. Цветные среды Гисса с углеводами (полужидкие):
Пептон — 10,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Углевод —5,0-10,0 г
Индикатор Андреде — 10 мл
(или 1 мл 1,6% раствора бромтимолового синего)
Агар — 5,0-8,0 г
Вода дистиллированная — 1000 мл
pH 7,2(±0,2)

После растворения ингредиентов в 1000 мл дистиллированной воды среду охлаждают до 50 °С, фильтруют через бумажный фильтр до полной прозрачности. Устанавливают pH, добавляют 5-10 г одного из необходимых углеводов (лактозу, глюкозу, маннит, ксилозу, арабинозу или 5,0 г крахмала, декстрина, гликогена и др.), а затем индикатор Андреде (10 мл на 1000 мл среды) или 1 мл 1,6% бромтимолового синего. Готовую среду разливают по 4 мл в узкие стерильные пробирки. Среду стерилизуют при 112 °С в течение 20 мин.

В результате роста бактерий, расщепляющих соответствующий сахар, среды, содержащие индикатор Андреде, приобретают ярко-розовую окраску, а среды с бромтимоловым синим из травянисто-зеленых превращаются в желтые.

- Читать далее "Рецепты питательных сред: пептонная вода для ферментации углеводов, бульон с феноловым красным"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.09.2019