В микробиологических лабораториях, кроме обычной лабораторной посуды (цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки и т. п.), используется специальная: бактериологические, серологические пробирки, пипетки, чашки Петри, колбы и т. д.

Существует несколько типов пробирок:

1. Биологические пробирки — с круглым дном, неразвернутым краем (без ранта); их размеры приведены в таблице ниже.

2. Центрифужные пробирки —отличаются от биологических тем, что сужены книзу. Существует несколько разновидностей центрифужных пробирок:
а) пробирка высотой 95 мм и диаметром 17 мм;
б) пробирка для малых количеств вещества коническая;
в) пробирка для малых количеств вещества с оттянутым концом:
высота всей пробирки: 40-50 мм
высота нижней (узкой) части: 20-80 мм
диаметр верхней части: 6-8 мм
диаметр нижней части: 1-3 мм

3. Прецинитационные пробирки — очень узкие: внутренний диаметр — 2-3мм, длина — 90-400 мм.

Все пробирки изготавливаются из прозрачного бесцветного стекла.

Для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах используют стеклянные чашки Петри. Они должны быть из прозрачного бесцветного стекла, не имеющего камней, пузырей и свилей. Высота чашки— 20-30 мм, диаметр — от 60 до 200 мм.

Для выращивания микроорганизмов на плотных и в жидких питательных средах, а также для работы с культурой ткани применяют плоские колбы или посевные матрасы.

Для точного отмеривания определенных объемов жидкости служат пипетки. Они представляют собой трубки из прозрачного бесцветного стекла, не имеющие на глаз кривизны (ГОСТ 1770-74). Пипетки бывают разных размеров, а следовательно, разной вместимости.

Кроме измерительных (градуированных) пипеток широко применяются пипетки для отмеривания определенных объемов жидкости — так называемые пастеровские пипетки и пипетки Мора. Пастеровские пипетки представляют собой стеклянные трубки диаметром 5-7 мм, у которых один конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра, а пипетки Мора имеют одну отметку с расширением.

Для точного отбора жидкости в лаборатории помимо обычных пипеток могут применяться механические пипетки, или пипеточные дозаторы: дозаторы переменного, фиксированного объема, устройства для дозирования больших объемов, электронные дозаторы и флаконы-деспенсеры переменного объема дозирования.

При необходимости все время дозировать один и тот же объем используют механические пипетки-дозаторы фиксированного объема, позволяющие одномоментно дозировать только 50 или 100 либо 1000 мкл и т. д. Если требуется периодически изменять объем дозирования, пользуются электронными или механическими дозаторами переменного объема (от 50 до 100 мкл, от 100 до 1000 мкл и т. д.). Типы дозаторов приведены в таблице ниже.

В комплекте с дозатором поставляется набор для его сборки/разборки, мелкого ремонта, калибровки и смазки поршневой системы. Обычная калибровка дозаторов осуществляется в лаборатории при помощи весов и в соответствии с инструкцией производителя.

Для работы с пипеточными дозаторами необходимо использовать оригинальные наконечники (упакованы в пакеты, коробки) или специальные штативы. Наконечники, размещенные в штативах, наиболее удобны для работы в бактериологической лаборатории, так как при использовании штатива ручные операции по насадке наконечника на дозатор сводятся к минимуму. Некоторые фирмы производят наконечники нескольких типоразмеров для различных дозирующих устройств (QSP, США; LP, Италия; Ratiolab, Германия и др.), а также универсальные наконечники, посадочная часть которых изготовлена таким образом, что они подходят для большинства типов дозаторов и дозирующих станций (AHN Biotechnology, Германия и др.). В наконечник для дозатора может быть вмонтирован гидрофобный мембранный фильтр с целью защиты его внутреннего механизма (также непосредственно в основание посадочного конуса поршневой системы дозатора, как правило, помещается защитный аэрозольный фильтр для тех же целей).

Для снятия наконечника с дозатора используется специальное встроенное в дозатор устройство-толкатель, которое позволяет сбросить использованный наконечник, не прикасаясь к нему руками. Это крайне необходимо при работе с инфицированными материалами и агрессивными средами. Неоспоримым преимуществом пинеток-дозаторов является обеспечение максимальной биологической и химической защиты персонала лаборатории, сведение к минимуму их контакта с инфицированным материалом.

В электронных дозаторах для забора, сброса и дозирования жидкости имеется встроенный электродвигатель, создающий разряжение. Такой дозатор-насос снабжен аккумулятором и требует периодической подзарядки от электросети через зарядный штатив или сетевой адаптер (электронный дозатор может работать автономно в интенсивном режиме в течение нескольких часов, после чего его необходимо подзарядить). В отличие от механического дозатора, при работе с которым необходимо большим пальцем руки постоянно нажимать на поршень, что требует достаточно большого усилия (до 2,5 кг и более), управление электронным дозатором осуществляется простым нажатием соответствующих кнопок на рукоятке (усилие — до 100 г).

Для одномоментного дозирования больших объемов жидкостей (50 мл и более) можно использовать, наряду со стеклянными, аналогичные градуированные пластиковые пробирки, мерные цилиндры и стаканы. При дозировании жидкостей обычными (объем от 1 до 100 мл) стеклянными или пластиковыми пипетками традиционную резиновую грушу можно заменить электронными бюретками-тираторами, а также специальными электронными устройствами-насосами. Эти устройства имеют встроенный электронасос и позволяют производить взятие и сброс жидкости с регулируемой скоростью. В них размещается гидрофобный фильтр для предотвращения заброса жидкости в дозатор. Можно также использовать модели дозаторов с ручным механическим приводом.

Для порционного (по 50 мкл, 100 мкл, 1 мл и т. д.) дозирования больших объемов жидкости без периодического ее забора из емкости следует использовать шаговый дозатор-степпер (мультидиспенсер) (рис. 2.5); или программируемый электронный дозатор, который можно эксплуатировать в качестве степпера. Флаконом-диспенсером нужно пользоваться при порционном дозировании жидкостей непосредственно из бутылей.

Для получения качественных результатов при работе с дозаторами необходимо изучить инструкцию по работе с дозатором конкретного типа. Дозатор следует держать в вертикальном положении, взятие жидкости и дозирование при помощи механических устройств нужно проводить плавно без рывков. При взятии жидкости наконечник не следует опускать в нее слишком глубоко. Перед всасыванием жидкости нужно промыть наконечник этой жидкостью 2-5 раз путем заполнения/опорожнения. Это особенно важно при дозировании вязких жидкостей, а также жидкостей, имеющих температуру, отличную от температуры окружающей среды.

При большом числе проб и реагентов для быстрого и точного дозирования растворов в пробирки или стандартные планшеты (тест-панели) можно использовать специальные дозирующие станции (например, дозирующие станции серии Microlab швейцарской фирмы «Hamilton» или станции серии Flexispense австрийской фирмы «ASYS Hitech» и др.).

Дозаторы производят из материалов, устойчивых к коррозии и агрессивным веществам, которые выдерживают автоклавирование без повреждений и потерь точности.

Вся остальная посуда, используемая в микробиологических лабораториях, — это обычная общелабораторная посуда.

Для посева микроорганизмов на твердые питательные среды используют стеклянный шпатель, один конец которого согнут (шпатель Дригальского). Он предназначен для нанесения (распределения, втирания) микробиологического образца на плотную среду (агар). Для посева микроорганизмов, кроме шпателей, пользуются бактериологической петлей или иглой.

Бактериологические петли и иглы изготовляют из тонкой платиновой или никель-хромовой проволоки, которую закрепляют в металлическом или пластмассовом держателе. Диаметр бактериологической петли - 4-5 мм. Используют также одноразовые стерильные шпатели и петли из полистирола.

Стеклянная лабораторная посуда может быть заменена пластиковой. Когда особенно жестко ставится вопрос о контроле качества проводимых исследований, следует ориентироваться на использование пластиковой посуды и расходных материалов преимущественно однократного применения. Нужно стремиться к тому, чтобы все принадлежности, так или иначе контактирующие с биоматериалом и реактивами, предназначенными для анализа биоматериала на наличие микроорганизмов, были изначально стерильными и одноразовыми.

В микробиологических лабораториях пользуются широким ассортиментом одноразовой стерильной пластиковой посуды, поставляемой производителем в герметичной полиэтиленовой упаковке, устойчивой к внешним воздействиям, в индивидуальной упаковке. Это разнообразные пробирки (с пробками, крышками и т. п.), чашки Петри с крышками (в т.ч. двух-, трех- и многосекционными), разнообразными тест-планшетами, пастеровские и обычные пипетки, микробиологические петли и иглы, шпатели, стерильные емкости с различными оригинальными приспособлениями для взятия биоматериала, емкости с транспортными средами, чашками и пробирками с готовыми к употреблению питательными средами, а также комбинированными миниатюрными тест-системами для выявления и идентификации широкого спектра микробов и определения их чувствительности к антимикробным препаратам.

Пластиковая лабораторная посуда и принадлежности изготавливаются, как правило, из полипропилена, полиэтилена (высокого и низкого давления) и поли-стирена(полистирола).

Полипропилен (обозначение: ПП/РР) при комнатной температуре в высокой степени устойчив практически ко всем используемым в лаборатории реактивам (альдегидам, спиртам, щелочам/гидроксидам, маслам, фенолу, неорганическим и органическим кислотам, солям и растворам солей), выдерживает без деформации нагревание до 135-145 °С, хорошо стерилизуется автоклавированием. Из него изготавливают штативы, емкости для сбора и транспортировки проб, наконечники для дозаторов, различные пробирки, пробки и др.

Полиэтилен (обозначение: ПЭ/РЕ) при комнатной температуре чувствителен ко многим органическим растворителям, устойчив к сильным кислотам и щелочам. Автоклавировать можно только изделия из ПЭ низкого давления. Из ПЭ изготавливают транспортировочные пакеты для продукции и отходов, флаконы, штативы, крышки для пробирок и т. п.

Полистирен/полистирол (обозначение: ПС/PS) обладает сравнительно небольшой химической устойчивостью, при комнатной температуре чувствителен к фенолу, хлороформу и другим органическим растворителям. Изделия из ПС автоклавированием не стерилизуются. Из него изготавливают, как правило, продукцию с повышенными оптическими характеристиками: чашки Петри, кюветы (в т. ч. для фотометров), планшеты-панели, пробирки и др.

Стерилизовать большинство изделий из пластика (только из ПП, ПЭ низкого давления) многократного применения в условиях лаборатории следует автоклавированием при температуре 121 °С, «холодной стерилизацией» (например, при помощи окиси этилена), ионизирующим излучением (при наличии соответствующего оборудования и только в условиях центральных стерилизационных отделений). Сухожаровую стерилизацию применять нельзя.

Для изделий в герметичных полиэтиленовых (или полипропиленовых) упаковках срок сохранения стерильности — до 3 лет, в упаковках других видов — до 1 года. Срок стерильности может быть увеличен на 1 год на конкретный вид продукции после истечения уже установленного срока и проведения повторного бактериологического анализа ранее отобранных образцов. В настоящее время отечественными производителями разрабатываются для серийного выпуска установки радиационной стерилизации изделий медицинского назначения непосредственно в ЛПУ.

За рубежом достаточно большой ассортимент продукции производится в асептических условиях по так называемой асептической технологии, не требующей конечной стерилизации.

Из пластмасс (преимущественно из полипропилена) изготавливаются также приспособления многократного применения — штативы, капельницы, бутыли, ванночки, которые используют в случаях, когда не требуется соблюдения особых условий стерильности при обращении с реагентами или же при отсутствии прямого контакта с ними.

Специализированные принадлежности из пластика. Особо стоит отметить специальные комбинированные системы однократного применения, помещенные в пластиковые емкости. Их можно подразделить на 3 группы:

1. Системы для взятия и транспортировки биоматериала. Они состоят из пластиковой емкости или пробирки либо контейнера с приспособлением для забора биоматериала (лопатка, палочка, тампон и т. п.) или без приспособлений; в емкости может также находиться стерильный физиологический раствор или иная жидкость-разбавитель. Такие системы следует использовать для взятия материалов, если образцы предполагается доставить в бактериологическую лабораторию в течение 2-4 ч и если не предъявляется специальных требований к сохранности микрофлоры биоматериала.

2. Системы для взятия и транспортировки биоматериала с сохранением жизнеспособности большинства микроорганизмов, в нем находящихся. Они аналогичны системам, относящимся к группе 1, но в них обязательно присутствует полужидкая, жидкая или плотная транспортная питательная среда или среда обогащения. Такие системы (транспортные коллекторы) позволяют хранить — транспортировать образцы в течение нескольких суток. Чаще всего в качестве транспортных сред используются среды Стюарта, Амиес и Кэри Блэйр. Наибольшее распространение у нас в стране получили системы фирм «Сорап» (Италия/ США), «Deltalab/Eurotubo» (Испания), «Becton Dickinson» (США) и «HiMedia» (Индия).

3. Системы для определения свойств микроорганизмов после выделения чистой культуры. Это обычные или секционированные чашки Петри либо пробирки с уже внесенными в них готовыми к употреблению питательными средами, тест-панели микротестов для рутинной идентификации микроорганизмов и определения их чувствительности к антибиотикам после выделения чистой культуры и т. п.

Утилизация одноразовой пластиковой посуды имеет ряд существенных преимуществ перед традиционным обеззараживанием посуды многократного применения (в т. ч. пластмассовой), сопряженным с использованием достаточно трудоемких, материалоемких и энергоемких методов, таких как автоклавирование при температуре 120 ± 2 °С (давление 0,11 МПа или 1 атм) в течение 60 мин и длительное замачивание в дезинфицирующих растворах (например, в 3% растворе хлорамина или 6% растворе перекиси водорода в течение 1 сут.). Наиболее эффективным и безопасным способом утилизации использованной пластиковой посуды является сжигание.

- Читать далее "Принадлежности для проведения микробиологических исследований и подготовки проб"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 29.04.2019