Питательные среды для анаэробов

Рецепт 68. Железосульфитная среда агаризованная и вязкая для мезофилъных анаэробных микроорганизмов. К 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 10 г триптона, 0,5 г сульфита натрия, 0,5 г железа (III) цитрата, 15 г агар-агара (для приготовления агаризованной среды) или 1,5 г агар-агара (для приготовления вязкой среды). Растворяют компоненты при нагревании, после этого смесь охлаждают до 50(±5)°С. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С 7,1(±0,1). Среду разливают в пробирки по 10-12 см3 или в колбы и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин.

Триптон можно заменить равноценной навеской сухого панкреатического гидролизата казеина или десятикратным объемом жидкого панкреатического гидролизата казеина.

Рецепт 69. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда агаризованная и вязкая. В 800 см3 воды вносят 10 г пептона, 15 г дрожжевого экстракта или 7,5 см3 жидкого дрожжевого экстракта, 5 г уксусно-кислого натрия. Отдельно 1 г растворимого крахмала вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см3, получают крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см3 смеси, содержащей остальные компоненты, добавляют 15 г агар-агара (для приготовления агаризованной среды) или 1,5 г агар-агара (для приготовления вязкой среды) и кипятят 30 мин.

Доводят объем среды до 1 дм3, добавляют 1 г глюкозы и 0,5 г L-цистеина гидрохлорида, охлаждают среду до 50(±5)°С. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,1 (±0,1). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют в автоклаве при 121(±1) °С в течение 15 мин. Перед использованием к 100 см3 среды добавляют 0,4 см3 раствора сульфита натрия с массовой концентрацией 100 г/дм3 (раствор предварительно стерилизуют текучим паром в течение 1 ч) и 2 см3 раствора железа (III) цитрата концентрации 50 г/дм3 (раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации). При необходимости среду разливают в пробирки по 10-12 см3.

Рецепт 70. Среда Вильсон-Блера агаризованная для мезофильных анаэробных микроорганизмови определения их сульфитредуцирующей способности. К 1 дм3 стерильного расплавленного и охлажденного до температуры 80 °С мясопептонного агара, содержащего 10 г/дм3 глюкозы и 2 г/дм3 дрожжевого экстракта, добавляют 10 см3 раствора сульфита натрия и 1 см3 раствора аммония железа (III) сульфата (Fe(NH4)(SO4)2*12Н2O). Устанавливают pH 7,5-7,8. Среду хранят в защищенном от света месте при при 6(±2) °С не более 7 сут.

Раствор аммония железа (III) сульфата концентрации 50 г/дм3 и раствор сульфита натрия с массовой концентрацией 100 г/дм3 готовят на стерильной дистиллированной воде ex tempore. Растворы стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.

Вместо раствора аммония железа (III) сульфата можно использовать раствор железа (III) аммония цитрата или раствор сульфата железа (FeSO4*5Н2P) (растворы стерилизуют текучим паром в течение 1 ч) либо раствор железа (III) цитрата пентогидрата (раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации); концентрация указанных растворов — 50 г/дм3.

Рецепт 71. Среда Вильсон-Блера вязкая для мезофильных анаэробных микроорганизмов. К 1 дм3 мясопептонного бульона с 0,1% глюкозы и 0,2% дрожжевого экстракта добавляют 1,5 г агар-агара. Среду нагревают до расплавления агара, затем охлаждают до 50(±5)°С. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С 7,1 (±0,1). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют в автоклаве при 121(± 1) °С в течение 20 мин, затем к среде добавляют растворы, указанные в рецепте агаризованной среды Вильсон-Блера.

Рецепт 72. Среда Вильсон-Блера агаризованпая или вязкая для определения сулъфитредуцирующей способности. Основу среды готовят так же, как и обычную среду Вильсон-Блера. Вместо указанных растворов-добавок используют на 100 см3 основы 4 см3 раствора сульфита натрия с массовой концентрацией 100 г/дм3 и 1 см3 железа треххлористого гексагидрата с массовой концентрацией 80 г/дм3 (растворы стерилизуют текучим паром в течение 1 ч). В этом случае готовая среда не подлежит хранению.

Рецепт 73. Среда Китт-Тароцци для мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов. Стерильные пробирки заполняют на 1-1,5 см кусочками печени, мяса или рыбы и заливают приготовленным мясопептонным бульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм3 мясопептонного, рыбопептонного или печеночного бульона вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агар-агара, который при нагревании постепенно расплавляют (высота слоя бульона в обычных пробирках 12-13 см, в высоких—15-18 см) и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин. Требуемую величину pH проверяют до и после стерилизации. pH среды после стерилизации должен быть 7,1 (±0,1).

При приготовлении среды впрок вместо добавления агар-агара на ее поверхность перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5-2 см вазелинового масла.

При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1-1,5 см.

При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут. с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность вазелиновое масло не обязательно.

Рецепт 74. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием для выявления мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов при анализе кислотных консервированных продуктов.

На дно пробирок или флаконов, предназначенных для среды Китт-Тароцци, вносят по щепотке углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом, закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясопептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду Китт-Тароцци как обычно.

Рецепт 75. Сульфат-лактатная среда для выделения термофильных сульфатредуцирующих бактерий (Desulfotomaculum nigrificans) при исследовании консервов. 5 г пептона растворяют в 1 дм3 воды, добавляют 4 г дрожжевого экстракта или 20 см3 раствора дрожжевого экстракта, 1,5 г сульфата натрия, 1,5 г сульфата магния, 3,5 г лактата натрия, устанавливают pH 7,2-7,4 и добавляют при приготовлении плотной среды 20 г агар-агара, вязкой—1,5 г агар-агара; подогревают до полного растворения. Стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную или регенерированную среду вносят соли Мора (двойная сернокислая соль закиси железа и аммония) из расчета 4 мг/см3. Для этого перед использованием раствор соли Мора концентрации 100 г/дм3 стерилизуют фильтрованием и вносят асептически в каждую пробирку по 4-5 капель. Лактат натрия можно заменить молочной кислотой, нейтрализованной гидроокисью натрия.

Рецепт 76. Триптозо-сульфит-циклосериновый агар для выделения С. perfingens. Основа среды: 15 г триптозы, 5 г ферментативного пептона, 25 см3 дрожжевого экстракта, 1 г безводного тиосульфита натрия, 1 г цитрата аммонийного железа, 20 г агар-агара растворяют в 1 дм3 кипящей дистиллированной воды. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,6(±0,1). Основу среды стерилизуют в автоклаве при 121(±1) °С в течение 20 мин и хранят при 4(±2) °С не более 14 сут.

К 100 см3 стерильной основы, расплавленной и охлажденной до 45-55 °С, добавляют непосредственно перед употреблением 1 см3 раствора циклосерина массовой концентрацией 40 г/дм3.

Триптозу при ее отсутствии можно заменить равным количеством ферментативного пептона.

Рецепт 77. Сахарный кровяной агар по Цейсслеру с антибиотиками для выделения С. perfingens. К 100 см3 стерильного расплавленного и охлажденного до температуры 50 °С мясопептонного агара добавляют 10 см3 стерильного раствора глюкозы концентрации 200 г/дм3 и 15-20 см3 свежевзятой стерильной дефибринорованной крови крупного рогатого скота, лошадей, овец. Смесь осторожно взбалтывают, избегая образования пены и пузырей. Добавляют 1 см3 раствора массовой концентрацией циклосерина 40 г/дм3 или 0,5 см3 раствора массовой концентрацией неомицина сульфата 10 г/дм3. Среду разливают по стерильным чашкам Петри, подсушивают и хранят не более 2 сут. при 4(±2) °С. Среда должна иметь pH 7,2-7,4.

Рецепт 78. Среда Роберта для С. perfingens. В 1 дм3 дистиллированной воды вносят 2 газотпо-кислогокалия, 2 г двузамещенного фосфорно-кислого калия, 1 гагара,30 гжелатина;посленабуханияжелатинана-гревают на водяной бане до полного растворения желатина и агара, добавляют 25 см3 стерильного мясопептонного бульона и 10 см3 раствора 2-,3-,5-трифенилтетразолий хлорида концентрации 10 г/дм3, устанавливают рН 7,1(±0,1), стерилизуют 3 сут. подряд при температуре 100(±1)°С в течение 20 мин или однократно при температуре 110(±1)°С в течение 15 мин. Среда должна быть бесцветной.

Рецепт 79. Желатин-лактозная среда для С. perfingens. 15 г триптозы или ферментативного триптона, 50 см3 дрожжевого экстракта, 120 г желатина, 5 г двузамещенного фосфорно-кислого натрия растворяют в 1 дм3 кипящей дистиллированной воды. Добавляют 10г лактозы и 5 см3 1% раствора индикатора фенолового красного. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,4(±0,1). Разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют в автоклаве при 121(+1)°С в течение 15 мин. Среду хранят при 4(±2)°С не более 21 сут. Перед употреблением среду кипятят в течение 10 мин на водяной бане.

Рецепт 80. Полужидкая питательная среда для изучения подвижности и восстановления нитратов. 5 г галактозы, 5 г глицерина, 1 г нитрата калия (не содержащего нитрита), 2,5 г двузамещенного фосфорно-кислого натрия (безводного), 3 г агар-агара растворяют в 1 дм3 кипящего мясопептонного бульона. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,3(±0,1). Разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин. В готовой питательной среде контролируют отсутствие нитритов. Среду хранят при 4(±2) °С не более 28 сут. Перед употреблением среду кипятят в течение 10 мин на водяной бане и быстро охлаждают до комнатной температуры. Среда должна иметь студнеобразную консистенцию.

Рецепт 81. Лакмусовое молоко для мезофильных клостридий при анализе молочных консервов и для С. perfingens. К стерильному молоку прибавляют лакмусовую настойку (водно-спиртовой раствор лакмуса) до получения сиреневатого окрашивания (на 100 см3 молока примерно 1 см3 лакмусовой настойки). Лакмусовое молоко разливают по стерильным пробиркам высоким столбиком, кипятят на водяной бане в течение 15-20 мин и охлаждают для посева до температуры 45 °С.

Лакмусовая настойка: к 10 см3 этилового 96° спирта добавляют 1 г лакмуса и выдерживают 3 сут. в термостате при температуре 37 °С, ежесуточно сливая окрашенный спирт и заливая новой порцией этилового спирта, после чего лакмус подсушивают в термостате, заливают дистиллированной водой и выдерживают при комнатной температуре в течение суток. Настойку фильтруют и хранят в темной склянке.

- Читать далее "Питательные среды для энтерококков"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 31.10.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.