Рецепт 117. Среда селективного обогащения типа бульона Фрейзера для выделения листерий. Среду Фрейзера готовят из сухого препарата промышленного изготовления (eioMerieux, HiMedia, Merk и др.) по прописи на этикетке.

При отсутствии сухих сред готовят основу среды: ферментативный гидролизат казеина — 5 г, пептон — 5 г, мясной экстракт — 5 г, дрожжевой экстракт — 5 г, натрий хлористый — 20 г, калия дигидрофосфат — 1,35, натрия гидрофосфат — 12 г, эскулин — 1 г, литий хлористый — 3 г, железа аммонийного цитрат—0,25, вода дистиллированная — 1000 см³. Компоненты растворяют, тщательно перемешивают и устанавливают pH 7,2(±0,2). Среду стерилизуют в автоклаве при 121 (± 1) °С в течение 15 мин. Перед употреблением в основу среды асептически вносят раствор селективных компонентов.

Раствор для приготовления среды типа бульона Фрейзера первичного обогащения: налидиксовую кислоту (10 мг), акрифлавина гидрохлорид (12,5 мг) растворить в 10 см³ стерильного 0,2 N гидроксида натрия.

Раствор для приготовления среды типа бульона Фрейзера вторичного обогащения: налидиксовую кислоту (20 мг), акрифлавина гидрохлорид (25 мг) растворить в 10 см³ стерильного 0,2 N гидроксида натрия.

Готовые среды разливают в стерильные колбы или пробирки и хранят в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.

Рецепт 118. PALCAM-агар (полимиксин-акрифлавин-лития хлорид-цефтазидим-эскулин-маннитол агар) — селективная дифференциально-диагностическая среда для выделения листерий. PALCAM-агар готовят из сухого препарата промышленного изготовления (BioMerieux, HiMedia, Merk и др.) по прописи на этикетке.

При отсутствии сухих сред готовят основу среды: пептон мясной ферментативный — 23 г, дрожжевой экстракт — 3 г, крахмал—1 г, натрия хлорид — 5 г, эскулин — 0,8 г, лития хлорид—15 г, железа аммония цитрат—0,5, глюкоза—0,5, маннит—10 г, феноловый красный — 0,08 г, агар-агар— 15 г. вода дистиллированная —1000 см³. Компоненты растворяют, тщательно перемешивают и устанавливают pH 7,0(±0,2). Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1) °С в течение 15 мин. Перед употреблением в расплавленную стерильную основу среды асептически вносят раствор селективных компонентов.

Раствор селективных компонентов: акрифлавин (0,005 г), полимиксин В (100000 ЕД), цефтазидим (0,02 г) растворить в 10 см³ стерильной дистиллированной воды.

Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.

Рецепт 119. Селективная дифференциально-диагностическая среда для выделения листерий типа Оксфорд-агара. Оксфорд-агар готовят из сухого препарата промышленного изготовления (BioMerieux, HiMedia, и др.) по прописи на этикетке.

При отсутствии сухих сред готовят основу среды: пептон мясной ферментативный — 23 г, крахмал кукурузный — 1 г, натрия хлорид—15 г, эскулин— 1 г, лития хлорид—15 г, железа аммония цитрат—0,5, глюкоза — 0,5, агар-агар—15 г, вода дистиллированная—1000 см³. Компоненты растворяют, тщательно перемешивают и устанавливают pH 7,0(±0,2). Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин. Перед употреблением в расплавленную стерильную основу среды асептически вносят раствор селективных компонентов.

Раствор селективных компонентов: акрифлавина гидрохлорид (0,005 г), циклогексимид (0,4 г), колистина сульфат (0,02 г), цефатетан (0,002 г), фосфомицин (0,01 г) растворяют в 10 см³ 50% этилового спирта.

Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.

Рецепт 120. Среда TSYEA (триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом) для выделения листерий. Готовят из сухого препарата промышленного изготовления (HiMedia, и др.) по прописи на этикетке.

При отсутствии сухих сред готовят среду состава: ферментативный гидролизат казеина—17 г, пептон соевый — 3 г, натрий хлористый — 5 г, фосфат калия однозамещенный — 2,5 г, глюкоза—2,5 г, дрожжевой экстракт—6,0 г, агар-агар— 15 г, вода дистиллированная — 1000 см³. Компоненты растворяют, тщательно перемешивают и устанавливают pH 7,3(±0,2). Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин.

Рецепт 121. Среда для определения подвижности листерий. 20 г ферментативного гидролизата казеина, 6 г пептона мясного ферментативного и 5 г агар-агара растворяют в 1000 см³ дистиллированной воды, устанавливают pH 7,3(±0,2) и разливают в пробирки по 5-7 см³. Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин.

Рецепт 122. Кровяной агар для идентификации листерий. К расплавленному и охлажденному до 45-50 °С питательному агару с 1% глюкозы (МПА с 1% глюкозы) добавляют 5% по объему дефибринированной крови животных. Разливают в стерильные чашки Петри диаметром 90 мм по 15 см³ среды и подсушивают при 37 °С. Посев производят в теплые чашки.

Рецепт 123. Кровяной агар с эритроцитами барана для идентификации листерий. Дефибринированную или стабилизированную цитратом кровь барана центрифугируют в асептических условиях 30 мин при 900 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Осадок суспендируют в стерильном физиологическом растворе до первоначального объема, добавляют в количестве 5% по объему к расплавленному и охлажденному до 45-50 °С МПА с 1% глюкозы. Разливают в стерильные чашки Петри по 10 см³ среды и подсушивают при 37 °С. Посев производят в теплые чашки.

Рецепт 124. Среда для определения лецитиназной активности листерий. К среде ГРМ №1 (ГНЦ ПМ) перед стерилизацией добавляют активированный уголь, растертый до порошкообразного состояния до концентрации 0,5% (вес/ объем). Желток куриного яйца асептически разводят в 150 мл стерильного физиологического раствора и добавляют 5% по объему к стерилизованному и охлажденному до 40-50 °С питательному агару. Разливают в стерильные чашки Петри по 20 см³ среды и подсушивают при 37 °С. Аналогично готовят среду с добавлением желтка, но без добавления активированного угля.

- Читать далее "Питательные среды для галофильных вибрионов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 31.10.2019