Рецепт 98. Среда Бликфельдта плотная для молочно-кислых бактерий. В 800 см³ дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 40 г дрожжевого экстракта или 200 см³ раствора дрожжевого экстракта, 5 г углекислого кальция, растертого в ступке непосредственно перед употреблением, доводят pH до 7,3(±0,1) и добавляют 15-20 г агар-агара. Среду разливают в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при 117(±1) °С не более 20 мин.

Рецепт 99. Среда Бликфельдта жидкая для молочно-кислых бактерий. В 950 см³ дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 4 г дрожжевого экстракта или 20 см³ жидкого дрожжевого экстракта, 32 см3 водного раствора (1 г/дм³) бромкрезолпурпура, устанавливают pH 7,3(±0,1), разливают в стерильную посуду и стерилизуют в автоклаве при 117(±1)°С не более 20 мин.

Рецепт 100. Среда Бригс в модификации Шарп для молочно-кислых бактерий. В 875 см³ дистиллированной воды вносят 15 г пептона, 20 г глюкозы, 25 см3 жидкого дрожжевого экстракта, 5 г уксусно-кислого натрия, 5 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 2 г аммония лимонно-кислого, 100 см³ томатного сока (в расчете на то, что в соке содержится не менее 4,5% растворимых сухих веществ; если в томатном соке содержится другое количество сухих веществ, то делают пересчет на содержание их 4,5%), 1 см³ твина-80, 5 см³ раствора солей (MgSO₄*7H₂)—11,5 г, MnSO₄*4H₂O — 2,86 г, FeS)₄*7H₂O— 0,68 г, дистиллированная вода—до 100 см³), 15 г агар-агара.

Смесь кипятят на слабом огне до полного растворения агар-агара. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,5(±0,1). Среду стерилизуют в автоклаве при 115(±1) °С в течение 15 мин.

Рецепт 101. Среда дрожжевая для мелочно-кислых бактерий. В 100 см³ жидкого дрожжевого экстракта добавляют 900 см³ дистиллированной воды, 10 г простерилизованного углекислого кальция и 100 г сахарозы. Смесь нагревают до растворения сахарозы, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,1 (±0,1), разливают в пробирки по 10 см³ и стерилизуют в автоклаве при 121 (± 1) °С в течение 15 мин.

Рецепт 102. Капустный агар для молочно-кислых бактерий. 200 г измельченной свежей капусты вносят в 1 дм³ водопроводной воды, смесь доводят до кипения и кипятят в течение 10-14 мин. Отвар фильтруют через ватномарлевый фильтр. Полученный фильтрат разводят водой в 2 раза, добавляют к нему 20 г глюкозы, 10 г пептона, 10 г углекислого кальция и расплавляют в нем при нагревании 15-20 г агар-агара. Устанавливают pH среды 7,0-7,4 и разливают ее в стерильные колбы. Среду стерилизуют автоклавированием при 121(±1)°Св течение 20 мин.

Рецепт 103. Среда МРС жидкая для молочно-кислых бактерий. В мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 10 г пептона, 20 см³ жидкого дрожжевого экстракта, 20 г глюкозы, 1 см³ твина-80, 2 г калия фосфорно-кислого двузамещенного, 5 г натрия ацетата, 2 г триаммония цитрата, 0,2 г сульфата магния, 0,05 г сульфата марганца (MnSO₄H₂O), доливают до метки мясную воду; растворяют компоненты при нагревании на водяной бане и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,2(±0,1).

Среду разливают в стерильные пробирки по 10 см³ и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин. Пробирки с питательной средой хранят при температуре 4(±1) °С не более 30 сут.

При необходимости для повышения селективности после стерилизации к 1 дм³ среды добавляют 1 см³ щелочного раствора сорбиновой кислоты. Раствор готовят следующим образом: 1 г сорбиновой кислоты переносят, смывая раствором NaOH концентрации 1 моль/дм³, в мерную колбу вместимостью 100 см³, объем доводят до метки тем же раствором. Полученный раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации. Можно обойтись без фильтрации, готовя раствор в асептических условиях с использованием для растворения NaOH стерильной дистиллированной воды.

Рецепт 104. Среда МРС агаризованная для молочно-кислых бактерий. Среду готовят по рецептуре среды МРС жидкой с добавлением 15-18 г агар-агара. После растворения всех компонентов среду разливают в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при 121 (±1) °С в течение 15 мин. Готовую среду хранят при температуре 4(±1)°С не более 30 суток.

При необходимости в среду добавляют раствор сорбиновой кислоты (см. рецепт среды МРС жидкой).

Рецепт 105. Мясопептонный бульон с pH 9,6 для молочно-кислых бактерий. В мясопептонном бульоне устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 9,6. Среду стерилизуют в автоклаве при 121 (± 1) °С в течение 20 мин.

Рецепт 106. Мясопептонный бульон с 6,5% NaCl для молочно-кислых бактерий. В 1 дм³ мясопептонного бульона растворяют 65 г NaCl. Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин.

Рецепт 107. Питательный агар с сахарозой для молочно-кислых бактерий. 100 г сахарозы, 15 г агар-агара добавляют в 1 дм³ мясопептонного бульона, периодически перемешивая, смесь нагревают до кипения и полного растворения всех компонентов. Среду охлаждают до 45-55 °С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,1 (±0,1). Среду разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 121 (± 1) °С в течение 15 мин. После стерилизации и проверки pH среду хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят при температуре 4(±1) °С не более 14 сут.

Рецепт 108. Среда Редди для молочно-кислых бактерий. Основа среды: в колбу, содержащую 500 см³ дистиллированной воды, добавляют 15 г агар-агара и нагревают на водяной бане до растворения агара. В другую колбу с 500 см³ дистиллированной воды вносят 10 г цитрата калия и 15 г карбоксиметилцеллюлозы и растворяют при нагревании. Содержимое обеих колб смешивают и добавляют 3 г пептона, 25 см³ жидкого дрожжевого экстракта, 1,25 г калия фосфорно-кислого двузамещенного, 5 г L-аргинина гидрохлорида, нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до 45-55 °С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,3(±0,2). Полученную таким образом основу среды стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин и хранят при температуре 4(±1)°С не более 30 сут.

Для приготовления питательной среды к 1 дм³ расплавленной и охлажденной до 45-55 °С основы добавляют 5 см³ стерильного обезжиренного молока, 100 см³ суспензии стерильного углекислого кальция массовой концентрацией 30 г/дм³ и 2 см³ водного раствора бромкрезолового пурпурного массовой концентрацией 1 г/дм³.

Рецепт 109. Среда Рогоза жидкая для молочно-кислых бактерий. В мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 10 г пептона, 25 см³ жидкого дрожжевого экстракта, 20 г глюкозы, 1 см³ твина-80, 6 г калия фосфорно-кислого однозамещенного, 2 г цитрата аммония, 25 г ацетата натрия, 1,32 см³ ледяной уксусной кислоты, 0,575 сульфата магния, 0,12 гсульфатамарганца(MnSO₄*2Н₂O), 0,034 сульфата железа, доливают до метки дистиллированной водой, растворяют компоненты при нагревании на водяной бане и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 5,4(±0,1). Среду разливают в стерильные пробирки по 10 см³ и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин. Пробирки с питательной средой хранят при температуре 4(±1) °С не более 30 суток.

Рецепт 110. Среда Рогоза агаризованная для молочно-кислых бактерий. Среду готовят по рецептуре среды Рогоза жидкой с добавлением 20 г агар-агара. После растворения всех компонентов среду разливают в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин. Готовую среду хранят при температуре 4(+1) °С не более 30 сут.

Рецепт 111. Среда из томатного сока для молочно-кислых бактерий. К 700 см³ воды добавляют 300 см³ томатного сока, 2 г дрожжевого экстракта или 10 см³ раствора дрожжевого экстракта, 10 г глюкозы, доводят pH до 5,5-5,6 и фильтруют, разливают по 100 см³ в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при 117(±1)°С в течение 20 мин. Отдельно в 500 см³ дистиллированной воды растворяют при нагревании 20 г агар-агара, разливают по 100 см³ в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин. Перед посевом в асептических условиях смешивают 100 см³ жидкой среды со 100 см³ расплавленного агара. Агаризованную среду вносят в чашки Петри, содержащие по 0,25 г стерильного углекислого кальция.

Рецепт 112. Бензидиновый реактив для определения цитохромов молочно-кислых бактерий. 1 г бензидина основного или солянокислого растворяют в 20 см³ 99,8% ледяной уксусной кислоты, добавляют 30 см³ дистиллированной воды и медленно нагревают. После охлаждения в раствор вносят 50 см³ 96% этилового спирта. Раствор хранят в холодильнике в течение 1 месяца.

Рецепт 113. Среда Lee (для молочно-кислых бактерий). Основа среды: в мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 10 г пептона, 50 см³ жидкого дрожжевого экстракта, 5 г лактозы, 3 г стерильного углекислого кальция, 0,5 г Na₂HPO₄, 18 г агар-агара и доливают дистиллированной водой до метки. Компоненты растворяют при нагревании на водяной бане и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,0(±0,1). Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин и, при необходимости, хранят при температуре 4(±1) °С не более 30 сут.

Для приготовления питательной среды к 1 дм³ основы добавляют 20 см³ стерильного раствора бромкрезолового пурпурного с массовой концентрацией 1 г/дм³, перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Среду хранят при температуре 4(±1) °С не более 7 суток.

Рецепт 114. Гидролизованное молоко для молочно-кислых бактерий. Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин, затем охлаждают до 45+2 °С. Доводят pH до 7,7(±0,1), используя для этого водный раствор с массовой долей NaOH 40%. К 1000 см³ молока добавляют от 0,5 до 1 г порошка панкреатина. Затем к молоку прибавляют от 5 до 6 см³ хлороформа. Колбу закрывают корковой пробкой и выдерживают при температуре 40(±2) °С 18-24 ч. В течение первых 3-5 ч молоко 2-3 раза перемешивают (пробку после перемешивания приоткрывают для удаления хлороформа).

Затем гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1, устанавливают pH 7,1 (±0,1), добавляя водный раствор с массовой долей NaOH 40%, и используют для приготовления агара с гидролизованным молоком. Для хранения гидролизованное молоко стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 15 мин.

Рецепт 115. Агар с гидролизованным молоком для молочно-кислых бактерий. К 1000 см³ гидролизованного молока добавляют 15 г агар-агара. Среду нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы, стерилизуют при 121(±1)°С в течение 10(+1) мин.

Рецепт 116. Стерильное обезжиренное молоко для молочно-кислых бактерий. Цельное молоко сепарируют. Обезжиренное молоко можно также получить путем центрифугирования (15 мин при 700-1500 g) или кипячения с последующим отстаиванием в холодильнике в течение 2 дней. Обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см³ и стерилизуют при 121(±1)°С в течение 10(±1) мин.

- Читать далее "Питательные среды для листерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 31.10.2019