Питательные среды для бактериологического исследования фармацевтических препаратов

Для бактериологического исследования фармацевтических препаратов используют питательные среды, рекомендованные Государственной Фармакопеей XI издания (ГФ XI) и Изменением №2 к ГФ XI, либо среды, опубликованные в 5-м издании Европейской Фармакопеи (ЕР 5) и в 27-м издании Фармакопеи США (USP 27).

Для стандартизации проведения анализов и получения достоверных воспроизводимых результатов предпочтительно пользоваться сухими средами производства отечественных и зарубежных предприятий после контроля их ростовых и селективных свойств и проверки стерильности. Сухие питательные среды готовят в полном соответствии с указаниями производителя. Среды стерилизуют в автоклаве в течение 15 мин при температуре 121 °С, если нет других указаний, при условии валидации процесса стерилизации.

Рецепт 136. Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (pH 7,0) для приготовления разведения лекарственных средств:
Калия фосфата однозамещенного — 3,6 г
Натрия фосфата двузамещенного — 7,2 г
Натрия хлорида — 4,3 г
Пептона (мясного или казеинового) — 1,0 г
Воды очищенной — 1000 мл

К буферному раствору можно добавить поверхностно-активные вещества и инактиваторы антимикробного действия, например твин-80 в количестве 1,0-10,0 г/л.

Рецепт 137. Жидкая тиогликолевая среда (Merck, cat. № 1.08191):
L-цистина — 0,5 г
Натрия хлорида — 2,5 г
Глюкозы моногидрата — 5,5 г
Агара гранулированного (влажность не более 15%) — 0,75 г
Дрожжевого экстракта (водорастворимого) — 5,0 г
Панкреатического гидролизата казеина — 15,0 г
Натрия тиогликолята — 0,5 г
или кислоты тиогликолевой — 0,3 г
Раствора резазурина натрия (1:1000) свежеприготовленного— 1,0 мл Воды очищенной — 1000,0 мл
pH после стерилизации 7,1 (±0,2)

В воду вносят L-цистин, агар, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина и нагревают до полного растворения. Добавляют натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту и, если необходимо, доводят pH среды до нужного значения 1 М раствором едкого натра. Добавляют раствор резазурина, перемешивают и разливают в пробирки соответствующего объема.

Рецепт 138. Жидкая среда Сабуро (ГФ XI, с193):
Пептона ферментативного — 10,0 г
Глюкозы моногидрата — 40,0 г
Воды очищенной — 1000,0 мл
pH после стерилизации 5,6(±0,2)

Пептон и глюкозу добавляют в воду и полностью растворяют при слабом нагревании. Охлаждают до комнатной температуры и доводят pH до требуемого значения. Фильтруют, если необходимо, и разливают в пробирки.

Рецепт 139. Соево-казеиновый агар (Casein Soya Bean Digest Agar, Merck, cat. № 1.05458):
Панкреатического гидролизата казеина — 15,0 г
Папаинового гидролизата бобов сои — 5,0 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Агара — 15,0
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,3(±0,2)

Аналог — отечественная среда для выращивания аэробных бактерий — Среда № 1 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 140. Агар Сабуро с глюкозой и антибиотиками (Sabouraud Glucose Agar with antibiotics, Merck, cat. №1.05438):
Пептона (мясного и казеинового) — 10,0 г
Глюкозы моногидрата — 40,0 г
Агара — 15,0 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 5,6(±0,2)

Аналог—отечественная среда для выращивания дрожжевых и плесневых грибов— Среда №2 (агар Сабуро с глюкозой и антибиотиками) для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Перед употреблением добавляют 0,1 г натриевой соли бензилпенициллина и 0,1 г тетрациклина на 1 л среды в виде стерильных растворов или 50 мг хлорамфеникола (левомицетина) на 1 л среды перед стерилизацией.

Рецепт 141. Бульон Мосселя для обогащения энтеробактерий (Enterobacteria Enrichment Broth—Mossel, Merck, cat. №1.05394):
Панкреатического гидролизата желатина — 10,0 г
Глюкозы моногидрата — 5,0 г
Бычьей желчи сухой — 20,0 г
Калия фосфата однозамещенного — 2,0 г
Натрия фосфата двузамещенного — 8,0 г
Бриллиантового зеленого —0,015 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH 7,2(±0,2)

Среду нагревают при 100 °С в течение 30 мин с последующим быстрым охлаждением.

Аналог—отечественная среда обогащения для энтеробактерий — Среда №3 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных: производителей.

Рецепт 142. Агар Мосселя (Crystal violet, Neutral Red, Bile Agar with Glucose, Merck, cat. Mb 1.10275):
Дрожжевого экстракта — 3,0 г
Панкреатического гидролизата казеина — 7,0 г
Солей желчи — 1,5 г
Лактозы моногидрата — 10,0 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Глюкозы моногидрата — 10,0 г
Агара — 15,0 г
Нейтрального красного — 0,03 г
Кристаллического фиолетового — 0,002 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH 7,4(±0,2).

Нагревают до кипения. Среду не автоклавируют.

Аналог—отечественная среда для выделения энтеробактерий — Среда № 4 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 143. Бульон Мак-Конки (MacConkey Broth, Merck, cat. № 1.05396):
Панкреатического гидролизата желатина — 20,0 г
Лактозы моногидрата — 10,0 г
Бычьей желчи сухой — 5,0 г
Бромкрезолового пурпурного — 10,0 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,3(±0,2)

Аналог—отечественная среда обогащения для энтеробактерий — Среда №3 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 144. Агар Мак-Конки (MacConkey Agar, Merck, cat. № 1.05465):
Панкреатического гидролизата желатина — 17,0 г
Пептона (мясного и казеинового) — 3,0 г
Лактозы моногидрата — 10,0 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Солей желчи — 1,5 г
Агара — 13,5 г
Нейтрального красного — 0,03 г
Кристаллического фиолетового — 0,001 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,1 (±0,2)
Перед стерилизацией кипятят 1 мин постоянно встряхивая.

Аналог — отечественная среда для выделения энтеробактерий— Среда №4 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 145. Дезоксихолат цитрат агар (Deoxycholate Citrate Agar, Merck, cat. №1.02896):
Мясного экстракта — 10,0 г
Мясного пептона — 10,0 г
Лактозы моногидрата — 10,0 г
Натрия цитрата — 20,0 г
Железа цитрата —1,0 г
Натрия дезоксихолата — 5,0 г
Агара — 13,5 г
Нейтрального красного — 0,02 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH 7,3(±0,2)

Доводят до кипения на медленном огне и кипятят в течение 1 мин, охлаждают до 50 °С и разливают в чашки Петри. Среду не автоклавируют.

Рецепт 146. Ксилоза, лизин, дезоксихолат агар (Xylose, Lisine, Deoxycholate Agar, Merck, cat. № 1.05287):
Ксилозы — 3,5 г
L-лизина — 5,0 г
Лактозы моногидрата — 7,5 г
Сахарозы — 7,5 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Дрожжевого экстракта — 3,0 г
Фенолового красного — 0,08 г
Агара — 13,5 г
Натрия дезоксихолата — 2,5 г
Натрия тиосульфата — 6,8 г
Железа аммоний цитрата — 0,8 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH 7,4(±0,2)

Доводят до кипения, охлаждают до 50 °С и разливают в чашки Петри. Среду не автоклавируют.

Рецепт 147. Агар с бриллиантовым зеленым, феноловым красным, лактозой и сахарозой (Brilliant Green Agar Medium,Merck, cat. № 1.07237):
Пептона (мясного и казеинового) — 10,0 г
Дрожжевого экстракта — 3,0 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Лактозы моногидрата — 10,0 г
Сахарозы — 10,0 г
Агара — 20,0 г
Фенолового красного — 0,08 г
Бриллиантового зеленого — 0,0125 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 6,9(±0,2)

Кипятят 1 мин. Используют сразу после автоклавирования.

Рецепт 148. Висмут-сульфит агар (Bismuth Sulfite agar, Merck, cat. № 1.05418):
Мясного экстракта — 5,0 г
Мясного пептона — 10,0 г
Глюкозы моногидрата — 5,0 г
Натрия фосфата двузамсщенного — 4,0 г
Железа сульфата — 0,3 г
Бриллиантового зеленого — 0,025 г
Висмута сульфита — 8,0 г
Агара — 15,0 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH 7,6(±0,2)

Среду не автоклавируют. Приготовленная среда мутная зеленого цвета. Аналог—отечественная среда для выделения сальмонелл — Среда №5 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 149. Соево-казеиновый бульон (Casein Soya Bean Digest Broth Merck, cat. № 1.05459):
Панкреатического гидролизата казеина — 17,0 г
Папаинового гидролизата бобов сои — 3,0 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Калия фосфата двузамещенного — 2,5 г
Глюкозы моногидрата — 2,5 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,3(±0,2)

Аналог—отечественная среда для выращивания бактерий — Среда №8 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 150. Цетримидный агар (Cetrimide Agar, Merck, cat. № 1.05284):
Панкреатического гидролизата желатина — 20,0 г
Магния хлорида — 1,4 г
Калия сульфата двузамещенного — 10,0 г
Цетримида (цетилпиридиния бромида) — 0,3 г
Агара — 13,6 г
Глицерина —10,0 мл
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,2(±0,2)

Аналог—отечественная среда для выделения синегнойной палочки—ЦПХ-агар для выделения синегнойной палочки, сухой.

Рецепт 151. ЦПХ-агар (Ф СП 42-0026065200):
Пептона сухого ферментативного — 20,0 г
Калия серно-кислого — 7,6 г
Магния серно-кислого семиводного — 2,4 г
Соды кальцинированной —1,0 г
Фенозан-кислоты — 0,2 г
ЦПХ (N-цетилпиридиния хлористого — 0,3 г
Сводного) —8 г
Агара — 1000 мл
Воды очищенной pH 7,2(±0,2)
Среду не автоклавируют.

Рецепт 152. Агар для выявления пиоцианина Pseudomonas (Pseudomonas Agar Medium for Detection ofPyocyanin, Merck, cat. №1.10988):
Панкреатического гидролизата желатина — 20,0 г
Магния хлорида безводного — 1,4 г
Калия сульфата безводного — 10,0 г
Агара —15,0 г
Глицерина —10,0 мл
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,2(±0,2)

Все компоненты, кроме глицерина, растворяют в воде. Нагревают при перемешивании и кипятят 1 мин. Добавляют глицерин и стерилизуют.

Аналог—отечественная среда для идентификации синегнойной палочки — Среда №9 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 153. Агар Берда-Паркера (Baird-Parker Agar Merck, cat. № 1.05406):
Панкреатического гидролизата казеина — 10,0 г
Мясного экстракта — 5,0 г
Дрожжевого экстракта — 1,0 г
Лития хлорида — 5,0 г
Агара — 20,0 г
Глицина — 12,0 г
Натрия пирувата — 10,0 г
Воды очищенной —950 мл
pH после стерилизации 6,8(±0,2)

После стерилизации охлаждают до 45-50 °С и добавляют 10 мл стерильного 1% раствора калия теллурита и 50 мл коммерческой желточной эмульсии.

Рецепт 154. Агар Фогеля-Джонсона (Vogel-Johnson Agar Medium, Merck, cat. № 1.05405):
Панкреатического гидролизата казеина -1- 10,0 г
Дрожжевого экстракта — 5,0 г
Маннита — 10,0 г
Калия фосфата двузамещенного — 5,0 г
Лития хлорида — 5,0 г
Глицина —10,0 г
Агара — 16,0 г
Фенолового красного — 0,025 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,2(±0,2)
После стерилизации охлаждают до 45-50 °С и добавляют 20 мл 1% стерильного раствора калия теллурита.

Аналог—отечественная среда для выделения золотистого стафилококка — Среда №10 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 155. Лактозный бульон (Lactose Monohydrate Broth, Merck, cat. № 1.07661):
Мясного экстракта — 3,0 г
Панкреатического гидролизата желатина — 5,0 г
Лактозы моногидрата — 5,0 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 6,9(±0,2)
После стерилизации следует быстро охладить среду.

Аналог — отечественная среда для предварительного обогащения энтеробактерий — Среда №11 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 156. Тетратионатный желчный бульон с бриллиантовым зеленым (Tetrathionate Bile Brilliant Green Broth, Merck, cat. № 1.05178):
Пептона — 8,6 г
Бычьей желчи сухой — 8,0 г
Натрия хлорида —6,4 г
Кальция карбоната — 20,0 г
Калия тетратионата — 20,0 г
Бриллиантового зеленого — 0,07 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH 7,0(±0,2)

Нагревают до кипения. Нельзя перегревать. Перед употреблением к 1000 мл среды добавляют 20 мл раствора йода с калия йодидом (йода металлического—6 г, калия йодида—5 г, воды очищенной — 20 мл).

Аналог—отечественная среда для выделения сальмонелл — Среда №12 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 157. Трехсахарный агар с солями железа (Triple Sugar-Iron-Agar, Merck, cat. №1.03915):
Мясного экстракта — 3,0 г
Дрожжевого экстракта — 3,0 г
Пептонов (казеинового и мясного) — 20,0 г
Натрия хлорида — 5,0 г
Лактозы моногидрата — 10,0 г
Сахарозы — 10,0 г
Глюкозы моногидрата — 1,0 г
Железо-аммоний цитрата — 0,3 г
Натрия тиосульфата — 0,3 г
Фенолового красного — 0,025 г
Агара — 12,0 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,4(±0,2)

Среду разливают в пробирки, наполняя их на ‘/3 объема. После стерилизации среду скашивают таким образом, чтобы образовались столбик и косяк.

Аналог—отечественная среда для идентификации сальмонелл — Среда №13 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Рецепт 158. Цитратный агар Симмонса (Simmons Citrate agar, Merck, cat. № 1.02501):
Натрия хлорида — 5,0 г
Магния сулъфата — 0,2 г
Аммония дигидрофосфата — 1,0 г
Калия гидрофосфата — 1,0 г
Натрия цитрата — 3,0 г
Бромтимолового синего — 0,08 г
Агара 20 г
Воды очищенной — 1000 мл
pH после стерилизации 7,2(+0,2)

Аналог — отечественная среда для идентификации E.coli — Среда № 14 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 31.10.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.