Определение активности липидов по методу Глевинда. Различия антиокислительной и антирадикальной активности

Онкология:

Популярные разделы сайта:

Одним из наиболее широко используемых методов определения активности природных антиоксидантов в липидах является метод Глевинда. В основу метода положена реакция взаимодействия стабильного радикала а,а-дифенилпикрилгидразила (ДФПГ) с антиоксидаптами. Разработал и обосновал этот метод в 1958 г. Блойс. Он установил, что растворы ДФИГ в спирте дают устойчивое темно-фиолетовое окрашивание. Максимум поглощения наблюдается при 517 нм даже при небольших концентрациях ДФИГ (порядка Ю-4 моль/л).

Если в раствор ввести вещества, способные роагировать со стабильными радикалами, то наблюдается обесцвечивание стандартных растворов до желтой окраски. Было найдено, что растворы ДФПГ обесцвечиваются при добавлении цистеипа, глутатиона, аскорбиновой кислоты, токоферола, полиароматических фенолов (гидрохинона, пирогаллола), ароматических аминов (n-фенилендиамина, n-аминофенола). Растворы ДФПГ по окисляют глюкозу, пурины, пирамидины, ароматические соединения с одной гидроксильной группой (например, тирозин). Спиртовые растворы ДФПГ частично окисляют SH-группы белков. Ионы металлов переменной валентности мешают реакции и должны быть удалены. Блойс предложил этот метод для определения количества природных антиоксидантов в биологическом материале в концентрациях по ниже 10-5 моль/л.

Глевинд применил этот метод для определения активпости природных антиоксидантов липидов крови и печени. Метод привлек внимание исследователей тем, что при достаточно простой, быстрой и сравнительно точной методике определений пе требует сложпого оборудования.
Поскольку метод основан на реакции природных антиоксидантов со стабильными свободными радикалами, то, по всей вероятности, активность, определяемая этим методом, должпа коррелировать с антирадикальной активностью.

Действительно, такая корреляция между величинами констант к7, измеренными методом ХЛ и методом с ДФПГ, была установлена более чем для 20 соединений, принадлежащих к разным классам ингибиторов радикальных процессов (различные алкилзамещенные фенолы, полифенолы, 3-оксипиридины, токоферол). Попытки же сопоставить экспериментальные данные по изменению плотности растворов ДФПГ в присутствии этих соединений с их антиокислительной активностью, измеренной на модели термического окисления метилолеата, не обнаружили каких-либо закономерностей.

Таким образом, активность соединений, определеппая методом Глевинда, характеризует способность реагировать со свободными радикалами и коррелирует с их антирадикальной активпостью.

Однако для метода существует ряд ограничений. Дело в том, что способностью обесцвечивать растворы ДФПГ обладают пе только антиоксиданты, но и соединения, которые являются хорошими восстановителями. Это существенно усложпяет интерпретацию экспериментальных данных и может служить источником ошибок. По-видимому, этим может быть объяснена завышенная во многих работах оценка антиокислительной активности аскорбиновой кислоты.

Довольно часто в биофизической литературе аскорбиновую кислоту относят к числу мощных биоантиоксидантов. Предложен ряд патентов по использованию аскорбиновой кислоты как антиоксиданта при хранении материалов биологического происхождения. Однако тормозящее действие аскорбиновая кислота, как правило, проявляет при окислении сложпых биологических систем, гдо всегда возможно присутствие окисленных форм антиоксидантов. Восстанавливая окисленные формы ингибиторов, аскорбиновая кислота увеличивает эффективность их действия, являясь хорошим синергистом для ингибиторов фенольного типа. Синергическое действие этого вещества осповапо па том, что аскорбиновая кислота и ее дигидроформа образуют окислительно-восстановительную систему, способпую легко принимать и отдавать водородные атомы.

При окислении индивидуальных веществ, не содержащих каких-либо примесей, аскорбиповая кислота неактивна, так как не является ипгибитором радикальных процессов. По данным работ, аскорбиповая кислота не тушит свечение ЭХЛ, т. е. не реагирует со свободными радикалами.

В заключение мы хотели бы еще раз остановиться на различии понятий антиокислительной и антирадикальпой активности липидов. К сожалению, в настоящее время в литературе нет четкого разделения этих понятий. Противоречия и всякого рода несоответствия могут возникать из-за того, что на различных моделях определяются равные характеристики действия (активности) липидов. Антиокислительная активность является брутто-характеристикой процесса окисления, скорость которого определяется соотношением скоростей нескольких элементарных реакций. Антирадикальная активность определяется скоростью одной элементарной реакции — реакции взаимодействия перекисных радикалов с природными антиоксидантами.

С помощью методов, основанных на измерении общей скорости процесса окисления (по поглощению кислорода, по паконлепиго гидроперекисей, по изменению числа двойпых связей, по расходованию антиоксидантов), измеряется аптиокислитольная активность липидов.

С помощью методов, основанных на измерении скорости взаимодействия свободных радикалов с антиоксидантами (многие разновидности ХЛ методов, фотоокисление, реакции со стабильными радикалами, папример с дифенилпикрилгидразилом), определяется аптирадикальная активность соединений. В следующей главе на примере а- и у- токоферолов будет показано различие этих двух попятий.

Таким образом, из изложенного материала следует, что достаточно полная и объективная информация об антиокислительных свойствах липидов не может быть получена с помощью одпого какого-либо метода. Необходимо комплексное исследование свойств липидов с применением ряда наиболее совершенных методов в модельных систем.

- Вернуться в раздел "онкология"

Оглавление темы "Оценка антиокислительной активности антиоксидантов в онкологии":