Для оценки процессов распознавания предложены следующие тесты:
• смешанная культура лимфоцитов (СКЛ);
• взаимодействие лимфоцитов с макрофагами, предварительно обработанными антигеном в системе in vitro:
• определение экспрессии молекул МНС класса II (презентация антигена);
• оценка образования цитокинов (ИФН-у, ИЛ-4 и др.) Т-клетками при распознавании специфического антигена;
• выявление специфических CD4+ и/или CD84 Т-лимфоцитов с использованием комплексов рекомбинантных молекул, обозначенных как тетрамеры (тетрамер МНС образуется при биотинилировании молекулы МНС и связывании их с четырехвалентной молекулой авидина), каждый из которых состоит из молекулы МНС класса I или II, нагруженной антигенным пептидом, и метки. В основе этого метода лежит прямое окрашивание антигенспецифических Т-клеток.

Для оценки активации лимфоцитов определяют:
• экспрессию лимфоцитами и другими клетками иммунной системы маркеров активации: CD25, CD69, CD71, HLA-DR и др.;
• внутриклеточные сигнальные молекулы лимфоцитов, в том числе внутриклеточную концентрацию ионов Са2+ экспрессию генов тирозин-киназ, протеинкиназу С, ядерные факторы транскрипции; активность НАДФН-оксидазы в нейтрофилах и моноцитах;
• уровень провоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1p, ИЛ-6, ИЛ-8 и др.) в сыворотке и биологических жидкостях;
• выработку провоспалительных цитокинов с участием рецепторов врожденного иммунитета (TLR и др.).

Если активация лимфоцитов блокируется до вступления в пролиферацию, то клетки подвергаются апоптозу и погибают. Такая массовая гибель активированных лимфоцитов лежит в основе феномена «апоптоза, индуцированного активацией». На этом основании была сформулирована концепция апоптогенных иммунодефицитов [Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1998].

С другой стороны, проблема усиленной активации иммунной системы становится одной из важнейших в патогенезе многих заболеваний человека, включая ВИЧ-инфекцию, многие воспалительные процессы и другие патологии. Оказалось, что следствие приобретенной гиперактивации иммунной системы — иммунодефицит.

Для исследования пролиферативной активности иммунокомпетентных клеток используют тесты на определение:
• пролиферативной активности лимфоцитов в ответ на митогены: фито-гемагглютинин, конканалин А, ЛПС и др.;
• пролиферативного ответа лимфоцитов на специфические антигены и аллергены.

По пролиферативному ответу лимфоцитов на стимуляцию фитогемаг-глютинином и конканалином А судят о функции Т-клеток; по ответу на стимуляцию ЛПС — о функции В-лимфоцитов, а на стимуляцию митогеном лаконоса — о взаимодействии между Т- и В-клетками.

Для оценки эффекторных функций иммунокомпетентных клеток используют тесты на:
• клеточную цитотоксичность (Т-киллеры, NK-клетки и др.);
• образование иммуноглобулинов в культуре В-лимфоцитов in vitro
• образование клетками иммунной системы иммуноцитокинов и ответ на них in vitro.

Цитотоксические тесты проводят, чтобы оценить способность Т-киллеров, NK-клеток, макрофагов убивать соответствующие клетки-мишени in vitro. Определение синтеза иммуноглобулинов в культуре антителообразующих клеток in vitro, а также в сыворотке — главные методы оценки функциональной активности В-лимфоцитов.

- Читать далее "Оценка иммунорегуляторного звена. Показатели иммунорегуляторного звена иммунитета"