Оценка иммунной системы — довольно сложная задача клинической иммунологии. Она имеет свои особенности и определенные методологические подходы. Помимо оценки иммунной системы по двухуровневому и патогенетическому принципу, сформировался третий принцип, который мы обозначаем как аналитический, основанный на комплексной оценке различных иммунных подсистем, например цитокиновой, рецепторов врожденного иммунитета (TLR, NLR), комплемента и т.д.

Один из таких подходов состоит в комплексной оценке системы цитокинов — важнейшей для организма системы медиаторов межклеточных взаимодействий. Следует отметить, что в клинической медицине выявляют существенный рост заболеваний, обусловленных избыточной или недостаточной активностью цитокинов. Чтобы установить роль цитокинов в иммунопатогенезе различных заболеваний, только определения содержания цитокина в биологических жидкостях недостаточно. Цитокиновая система — крайне сложный компонент иммунной системы, включающий:

• клетки-продуценты цитокинов;
• гены и сигнальные пути, связанные с выработкой цитокинов;
• растворимые или мембранные формы цитокинов и их антагонисты;
• клетки-мишени цитокинов;
• рецепторы цитокинов, экспрессируемые клетками-мишенями;
• сигнальные пути, запускаемые через цитокиновые рецепторы, и экспрессия генов, связанных с их реализацией;
• группа растворимых рецепторов цитокинов.

Все эти этапы крайне важны для функционирования цитокиновой системы. Известны заболевания, в иммунопатогенезе которых может наблюдаться нарушение любого из названных механизмов.

В качестве примера можно рассмотреть участие некоторых цитокинов в иммунопатогенезе туберкулеза. CD4+ и CD8 Т-лимфоциты вырабатывают ИФН-у, участвующий в активации макрофагов и других клеток при инфицировании микобактериями. Однако туберкулезная инфекция протекает крайне тяжело у больных, имеющих мутантный рецептор ИФН-у. При этом уровень ИФН-у в циркуляции у больных с тяжелой формой туберкулеза может быть нормальным или повышенным, однако нарушена его рецепция (вследствие дефекта рецептора). Известно, что ФНО-а необходим для защиты против микобактерий и принимает активное участие в образовании гранулем. В последние годы для лечения некоторых аутоиммунных заболеваний, например ревматоидного артрита, стали использовать лекарственные средства на основе моноклональных антител против ФНО-а. При ревматоидном артрите уровень ФНО-а существенно превышает нормальные показатели, но под влиянием специфических антител он снижается вплоть до нормальных значений. У большинства больных наступает ремиссия заболевания. Однако в некоторых случаях с высокой частотой происходит реактивация латентной формы туберкулезной инфекции. Подобного рода примеров довольно много при самых разных заболеваниях.
Возникает крайне важная проблема клинической иммунологии: как и на каком уровне следует оценивать разные этапы, связанные с выработкой и рецепцией цитокинов?

Комплексный анализ системы цитокинов включает несколько последовательных этапов.
• Анализ на уровне клеток-продуцентов (мононуклеарные клетки, лимфоциты, лейкоциты, макрофаги, ДК и др.)

Генный уровень
- Исследование генов, которые ответственны за синтез цитокинов и их полиморфизмов, методами, основанными на ПЦР.
- Идентификация адаптерных и других молекул, которые проводят сигнал, запускающий транскрипцию цитокиновых генов (ПЦР, иммуноблоттинг и др.).

Клеточный уровень
- Выявление и определение количества клеток (ТЫ, Th2, регуля-торные Т-лимфоциты и др.), содержащих цитокины (методом внутриклеточного окрашивания цитокинов).
- Подсчет количества клеток, секретирующих анализируемые цитокины (методом ELISPOT).

• Анализ растворимых цитокинов и их антагонистов в биологических средах организма
- Количественное определение цитокинов с помощью ИФА. - Тестирование биологической активности цитокинов на различных моделях (клеточные линии, клетки-мишени и др.).
- Иммуногистохимическое окрашивание цитокинов в тканях. - Определение соотношения оппозитных цитокинов (например, про- и противовоспалительных), а также цитокинов и их антагонистов.

• Определение действия цитокинов на клетки-мишени
- Выявление экспрессии рецепторов цитокинов и их генов (проточная цитофлюориметрия, ПЦР).
- Анализ молекул, участвующих в передаче сигнала с рецепторов цитокинов в клетках-мишенях (ПЦР, иммуноблоттинг).
- Анализ фенотипа и функциональной активности клеток-мишеней после действия на них конкретного цитокина (проточная цитофлюорометрия, методы биологического тестирования). В клинической практике с научными и диагностическими целями используют самые разнообразные методы (в зависимости от оснащенности иммунологической лаборатории):

• методы генотипирования;
• молекулярно-биологические методы;
• методы количественного определения растворимых цитокинов с помощью иммуноанализа;
• тестирование биологической активности цитокинов;
• выявление внутриклеточных цитокинов;
• метод ELISPOT, который позволяет определить единичные клетки, продуцирующие цитокины;
• иммунофлюоресценцию.

- Читать далее "Генно-молекулярные методы в иммунологии. Количественное определение цитокинов"