Бактериоскопия возбудителя сибирской язвы (B. anthracis)

а) Бактериоскопия. Из поступившего патологического материала готовят несколько мазков, которые подсушивают на воздухе, фиксируют в спирте с добавлением 3% перекиси водорода не более 30 мин, после этого окрашивают но Граму и на капсулу одним из методов (по Ребигеру, Михину, Романовскому-Гимзе). В окрашенных мазках из патологического материала В. anthracis представляет собой грамположительные палочки, располагающиеся короткими цепочками или попарно. Концы палочек, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены.

В отдельных случаях (чаще в мазках от человека или свиней) форма возбудителя сибирской язвы может быть не характерной (короткие толстые или изогнутые, иногда зернистые палочки со вздутием посередине или на конце, возможно наличие «теней» микробов).

Для обнаружения капсул лучшим красителем является раствор Ребигера, который одновременно фиксирует и красит. В красителе нефиксированный или фиксированный мазок выдерживают 35-60 с, затем промывают водой и высушивают. В мазках из свежего патологического материала капсула вокруг микроорганизма окрашивается в розовый или красно-фиолетовый цвет, тело микробной клетки — в темно-фиолетовый.

При окраске мазков из несвежего патологического материала микроорганизмы могут быть несколько увеличены, концы закруглены, морфологическая стройность бацилл нарушена, они как бы «изъедены», иногда остаются «тени», а от капсулы могут оставаться одни обрывки, которые окрашиваются очень слабо.

Возбудитель сибирской язвы

б) Люминесцентная микроскопия. Для люминесцентной микроскопии делают мазки из экссудата брюшной полости биопробных животных, мазки-отпечатки из отечной жидкости и внутренних органов людей и животных, мазки из подозрительных колоний, выросших из посевов проб на чашках с питательными средами, из смывов, суспензий, вытяжек из материалов, подозрительных на заражение возбудителем сибирской язвы. Мазки подсушивают на воздухе и фиксируют в этиловом спирте с 3% перекиси водорода в течение 30 мин. На высохшие фиксированные мазки наносят в рабочих разведениях, указанных на этикетке, соответствующие диагностические сибиреязвенные люминесцирующие адсорбированные иммуноглобулины (люминесцентная антиспоровая сыворотка, соматическая, капсульно-соматическая) в зависимости от исследуемого материала.

В исходных пробах могут быть обнаружены сибиреязвенные микробы в споровой, вегетативной и капсульной форме.

Мазки с нанесенными на них люминесцирующими иммуноглобулинами помещают во влажную камеру — чашку Петри или эксикатор с увлажненной бумагой или комочком ваты, выдерживают для окрашивания при 37°С в течение 20 мин. Затем их тщательно промывают 2 раза по 10 мин в физиологическом растворе, потом в дистиллированной воде и высушивают на воздухе. Мазки микроскопируют в люминесцентном микроскопе с системой подобранных светофильтров, под иммерсионным объективом х90. При этом необходимо пользоваться нефлуоресцирующим иммерсионным маслом.

В случае его отсутствия применяют смесь, содержащую 1 часть физиологического раствора и 9 частей химически чистого глицерина. Для получения наиболее яркой люминесценции микробов следует применять светофильтры возбуждающего света ФС-1-2, СС-15-2 и запирающие светофильтры ЖС-18 или ЖС-19. Споры и вегетативные клетки сибиреязвенного микроба, окрашенные люминесцирующими иммуноглобулинами, дают яркое свечение на периферии клеток, имеющих характерную для данного вида морфологию. Такое свечение называется специфическим, в отличие от неспецифического свечения, характеризующегося равномерным неярким свечением всей поверхности клеток. Для учета результатов используется арбитражная система по интенсивности свечения и количеству специфически светящихся клеток:

- 4+ — большое количество специфически светящихся клеток, расположенных длинными цепочками (вегетативная форма), очень яркая флуоресценция по периферии споры или вегетативной клетки, четко контрастирующая с темным телом клетки;

- 3+ — яркая флуоресценция периферии клетки, клетки расположены отдельными группами (цепочками) и единично;

- 2+ или 1+ — слабое свечение периферии клетки, не контрастирующее с ее телом.

Свечение спор и вегетативных клеток на 4+ и 3+ дает повод подозревать наличие в исследуемом материале возбудителя сибирской язвы и позволяет дать предварительный положительный ответ. Такие пробы подлежат дальнейшему исследованию.

- Читать далее "Биологический метод диагностики возбудителя сибирской язвы (B. anthracis)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 21.12.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.