Определение энтерококков в воде

Энтерококки являются общепринятым дополнительным показателем фекального загрязнения воды (в ряде стран их определение введено в стандартные методы исследования качества питьевой воды). Энтерококки — грамположительные овальные бактерии, капсул не образуют. В мазках из культур располагаются парами или короткими цепочками, реже одиночно. Склонны к полиморфизму. В отличие от других грамположительных кокков энтерококки каталазоотрицательны. Растут при температуре 10-45 °С (оптимум 37 °С). При росте на жидких средах вызывают диффузное помутнение и образование осадка.

а) Титрационный метод. Индекс энтерококков в воде определяют в 1-2 параллельных рядах посевов в жидкой щелочной полимиксиновой среде с 10-кратными разведениями, начиная со 100 и до 0,01 мл (в зависимости от предполагаемого загрязнения воды). Посев 100 и 10 мл воды производят во флаконы со средой двойной концентрации, посев 1 мл и разведений — в пробирки с 5 мл среды нормальной концентрации. Посевы инкубируют 24 ч при 37(±1)°С.

Если признаков роста (помутнение и изменение окраски среды, приобретающей желтый цвет) не наблюдается, то посевы оставляют в термостате и окончательно просматривают через 24 ч. Отсутствие помутнения и изменения цвета среды во флаконах и пробирках в этом случае свидетельствует об отрицательном результате и позволяет закончить исследование.

Из каждого флакона или пробирки, в которых замечено помутнение и изменение цвета среды, делают посев петлей на поверхность молочно-ингибиторной среды (МИС), разделенной на 3-4 сектора. Через 24-48 ч культивирования при 37(+1) °С отмечают наличие аспидно-черных выпуклых с металлическим блеском (Enterococcus faecalis) или сероватых мелких плоских (Е. faecium) колоний. Принадлежность обнаруженных характерных колоний к энтерококкам подтверждают путем микроскопии окрашенных но Граму мазков и постановкой каталазного теста.

Для проведения теста на наличие каталазы используют свежую (не старше 24 ч) культуру. На колонию микроорганизмов, взятую с питательной среды и помещенную на чистое предметное стекло, наносят каплю 3% раствора перекиси водорода. Если через 30-60 с на стекле появляются пузырьки газа, то считают, что это результат разложения перекиси водорода каталазой, образуемой микроорганизмами.

Индекс энтерококков рассчитывают по таблицам.

б) Метод мембранных фильтров. В зависимости от степени предполагаемого загрязнения воды фильтруют 100 и 10 или 1 и 0,1 мл воды. Подготовка к фильтрованию и собственно фильтрование описаны в отдельной статье на сайте.

После окончания фильтрования мембранные фильтры, не переворачивая, помещают на поверхность азидной среды Сланеца-Бертли. Посевы инкубируют 24-48 ч при 37(±1)°С. Подсчитывают типичные колонии (выпуклые с ровными краями розовые, светло-розовые равномерно окрашенные или с темно-вишневым нечетко оформленным центром). После подтверждения принадлежности выделенных характерных колоний к энтерококкам (морфология клеток, окраска по Граму, каталазный тест) подсчитывают число таких колоний на фильтрах, суммируют и делят на объем профильтрованной воды.

При работе с азидной средой необходимо учитывать взрывоопасность и токсичность азида натрия, входящего в состав среды!

- Читать далее "Определение стафилококков в воде"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.09.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.